| 研究課題/領域番号 |
26712010
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
柏崎 隼 神戸大学, 学内共同利用施設等, 助教 (70570654)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 収縮環 / 細胞質分裂 / 分裂酵母 / アクチン / ミオシン |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、細胞を物理的に二分する細胞質分裂のメカニズムについて、in vivoライブイメージングとin vitro再構成系の両方を駆使して包括的かつ詳細に明らかにすることを目的とする。平成２８年度は分裂酵母のゴーストを用いた収縮環の収縮機構について、更に詳細に解析を行った。
細胞ゴーストの作製とin vitro再構成については、現在まで収縮環収縮時のみ成功している。収縮環の形成や解離の過程には細胞質成分が特に重要であると考えられる。分裂酵母の細胞質抽出液の調製法も引き続き検討している。
また、研究計画にある収縮環の単離を行うため、スフェロプラスト化および同調的な収縮環形成の条件検討を行った。まず細胞壁溶解酵素について検討した。以前使用していたものと異なるものを用いることで、より低コスト、高効率でスフェロプラストを得ることができた。また、温度感受性変異株を用いることで同調的に収縮環を形成させるが、温度シフトのタイミングをさらに検討し、より多くのスフェロプラストに収縮環を形成させることができた。効率的に収縮環を単離する方法をさらに検討し、超解像顕微鏡や電子顕微鏡を用いた収縮環の微細構造解析を引き続き進めている。また、収縮環中のミオシン分子の配向を微細構造解析により明らかにするため、配向がわかるように遺伝子工学的に改変したミオシンを発現する分裂酵母株を作製した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
進捗が遅れている理由として、平成２８年度は研究実施場所の変更があり、にそれ続いて研究機関の変更があったため、研究環境の整備などで研究の時間が十分とれなかったことが挙げられる。これまで使用していた３次元観察が可能な蛍光顕微鏡が使用できなくなったため、新たに蛍光観察用のシステムを構築した。現在は簡易的ではあるが観察ができるようになっており、その他の実験環境も整ってきたため、最終年度である平成２９年度は研究の遅れを取り戻したい。
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| 今後の研究の推進方策 |
上述の通り、研究実施場所および研究機関の変更があったため、これまで利用していた蛍光顕微鏡等の共通機器が使用できないこと、新たに利用できる共通機器があることから、現在の研究環境に沿った研究計画を練り直した。これまで成功している収縮環の単離に焦点を絞り、収縮環の構成因子や微細構造の解析を中心に進めていきたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究実施場所の変更、所属研究機関の変更などがあり、研究計画に遅れが生じたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
研究の遅れを取り戻すため、実験補助員の雇用、受託サービスやキットの利用など、より効率的に研究を進めるために使用する。また、蛍光顕微鏡観察ができる環境の整備も進める。
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