| 研究課題/領域番号 |
26712026
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
岩森 巨樹 九州大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (70647362)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 生殖生物学 / 幹細胞 / 細胞間架橋 / エピジェネティックス |
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| 研究実績の概要 |
本研究ではJMJD3により制御される連結精子幹細胞の断片化を促進するエピジェネティックネットワークの解析を中心課題としており、得られた結果を新たに開発した断片化を可視化できる精子幹細胞を用いて検証することを計画していた。まず、JMJD3が制御するエピジェネティックネットワークの解析においては得られた結果があまりいいものではなかったため、再度次世代シークエンサー解析を行う予定であった。しかし、サンプル回収途中で、動物飼養保管施設において感染事案が発生し、全ての遺伝子組み換え動物の清浄化の必要が生じたため、1年以上の遅延を余儀なくされた。そのため、一年の延長申請を行い、翌年度に解析を行う予定である。また、可視化精原細胞の開発については一遺伝子を対象としたゲノム編集については成功したが、やはり複数個所の同時ゲノム編集は成功しなかった。複数箇所同時ゲノム編集については多量の遺伝子導入が可能な専用機器の導入が必要であると思われる。現在2遺伝子までノックインができており、上記次世代シークエンサー解析の前までに3遺伝子めのノックイン細胞が得られていると思われる。
一方で、JMJD3の制御するエピジェネティックネットワーク解析結果はいいものではなかったが、いくつかの情報をもたらした。JMJD3欠損によってMMP3やMMP13の発現が減少しており、特にMMP3の分解基質は精子幹細胞に重要なラミニンであることから、幹細胞が増加するための足場を増やしていることが示唆された。一方で、JMJD3欠損により、多数のヒストンに加えて、MSI2Hが増加していた。MSI2Hは神経幹細胞に発現するRNA結合タンパク質であることから、JMJD3欠損によ幹細胞増加を補佐する結果であるほか、MSI2HによるRNA制御が幹細胞維持に必要であることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
遺伝子改変マウス飼養保管施設で感染事故が発生し、全ての動物の清浄化が必要となったため、1年以上の遅延が発生した。
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| 今後の研究の推進方策 |
遺伝子改変マウスの状況がまだ完全ではないものの回復してきているので、回復し次第、サンプル回収を再開し、次世代シークエンス解析を行う。解析結果が得られれば、断片化可視化精原細胞を用いた検証に入っていく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成27年度8月次世代シークエンサー解析を委託したが、サンプル量が不十分であり、再度サンプル調整が必要となった。その後、平成27年10月実験に使用するマウス飼育室内での原虫感染により、飼育室内全てのマウスの安楽死、及びクリーニングが必要となり、実験に使用できるように回復するまで1年以上の期間がかかった。現在次世代シークエンサー解析を委託する予定であるが、年度内の執行は難しいため、延長が必要である。
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| 次年度使用額の使用計画 |
大部分を次世代シークエンサー委託経費として使用し、他に実験動物購入費、分子生物学実験用消耗品、細胞培養液、および試薬の購入に使用する。また、研究成果の発表のための旅費として使用する。
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