遺伝学とプロテオーム解析を組み合わせたDNA損傷応答の新規制御機構の解明

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26740018
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 笹沼 博之 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (00531691)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: DNA損傷 / プロテオーム / 遺伝学

研究実績の概要

遺伝学的な解析が可能であるニワトリDT40細胞を用いて、DNA損傷修復に極めて重要な因子の一つであるBRCA1の相互作用因子を質量分析機を用いて解析を行った。その結果、BRCA1蛋白質はDNA損傷応答に関わる因子だけでなく転写や染色体分配に関わる多くの因子と相互作用することが明らかになった。その中には、今までBRCA1と相互作用するという報告がない因子も含まれている。研究期間中に新規遺伝子の同定まで至ったという点で、当初の目的は達成されたと考えている。現在、その新奇遺伝子の機能解析を実施している。
また研究期間の後半からゲノム編集技術(TALEN, CRISPR)を用いてヒトBRCA1変異細胞と3FLAGエピトープ配列をBRCA1のN末端領域にノックインした細胞を樹立した。このヒト細胞を用いてプロテオーム解析を実施中であり、今後ニワトリ細胞とヒト細胞を比較することにより多機能分子であるBRCA1の機能の全容を明らかにできると考える。

研究成果

• [雑誌論文] The role Mre11-Rad50-Nbs1 complex in double-strand-break repair - Myth and Facts (2016)
  • 著者名/発表者名: Shunichi Takeda, Nguyen Ngoc Hoa, and Hiroyuki Sasanuma,H.
  • 雑誌名: Journal of Radiation Research 巻: 1 ページ: 1
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The Double-Strand Break Landscape of Meiotic Chromosomes Is Shaped by the Paf1 Transcription Elongation Complex in Saccharomyces cerevisiae (2016)
  • 著者名/発表者名: Gothwal, S.K., Patel, N.J., Colletti, M.M., Sasanuma, H., Shinohara, M., Hochwagen, A., and Shinohara, A
  • 雑誌名: Genetics 巻: 202 ページ: 497-512
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Relative contribution of four nucleases, CtIP, Dna2, Exo1 and Mre11, to the initial step of DNA double-strand break repair by homologous recombination in both the chicken DT40 and human TK6 cell lines (2015)
  • 著者名/発表者名: Hoa NN, Akagawa R, Yamasaki T, et al., Sasanuma H
  • 雑誌名: Genes to Cells 巻: 20 (12) ページ: 1059-1076
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Smarcal1 promotes double-strand-break repair by nonhomologous end-joining (2015)
  • 著者名/発表者名: Keka IS, Mohiuddin, Maede Y, Rahman MM, Sakuma T, Honma M, Yamamoto T, Takeda S, Sasanuma H
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res 巻: 43 (13) ページ: 6359-6372
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Abacavir, an anti-HIV-1 drug, targets TDP1-deficient adult T cell leukemia (2015)
  • 著者名/発表者名: Tada, K., Kobayashi, M*., et al, Sasanuma, H, Takeda, S, Takaori-K, A
  • 雑誌名: Science advances 巻: 1 ページ: e1400203
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] BRCA1 and CtIP Are Both Required to Recruit Dna2 at Double-Strand Breaks in Homologous Recombination (2015)
  • 著者名/発表者名: Hoa NN, Kobayashi J, Omura M, Hirakawa M, Yang SH, Komatsu K, Paull TT, Takeda S, Sasanuma H
  • 雑誌名: Plos one 巻: 10 (4) ページ: e0124495
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] BRCA1 and CtIP are Both Required to Recruit Dna2 at Double-Strand Breaks in Homologous Recombination, (2015)
  • 著者名/発表者名: Hoa NN, Kobayashi J, Omura M, Tsuda M, Hirota K, Komatsu K, Takeda S, Sasanuma H,
  • 学会等名: 2nd IFOM-Kyoto univ. joint symposium
  • 発表場所: 京都大学
  • 年月日: 2015-10-06 – 2015-10-07
  • 国際学会
• [学会発表] ヒト細胞を用いたDNA損傷修復研究の純遺伝学解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 笹沼博之、武田俊一
  • 学会等名: Genome damage network workshop
  • 発表場所: 伊香保、群馬
  • 年月日: 2015-06-27 – 2015-06-28
  • 招待講演