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2015 年度 実績報告書

Gタンパク質シグナルに応答するスイッチングゲノム編集技術

研究課題

研究課題/領域番号 26820362
研究機関神戸大学

研究代表者

石井 純  神戸大学, 学内共同利用施設等, 准教授 (40512546)

研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2016-03-31
キーワード遺伝子発現スイッチ / ゲノム編集 / Gタンパク質共役型受容体 / 酵母
研究実績の概要

Gタンパク質シグナルに応答するスイッチングゲノム編集技術として、Cre/loxP組換えシステムを利用することで「遺伝子が抜け落ちて代わりに別の遺伝子が発現する」系を確立した。これにより、Gタンパク質に由来するシグナルを検知して遺伝子発現の「ON→OFF」と「OFF→ON」を同時に引き起こすことが可能となった。具体的には、2種類の遺伝子をプロモーターの下流に並列に配置し、上流側に位置する1つ目の遺伝子の両端にloxP配列を付加することで、Creリコンビナーゼが作用した場合に、1つ目の遺伝子が欠落して代わりに2つ目の遺伝子が発現する酵母を作出した。さらに、人工転写因子の働きによりGタンパク質に由来するシグナルを検知してCre遺伝子を発現するように酵母を改変した。この酵母を用いることで、Gタンパク質共役型受容体(GPCR)が二量体を形成した場合にのみloxP配列の間で組換えが起こり、2種類の遺伝子の発現がそれぞれ「ON→OFF」と「OFF→ON」に切り替わるシステムを確立した。酵母内在性GPCRであるSte2を用いたところ、Ste2がホモ二量体を形成した場合のみシグナルを検出して2種類の遺伝子発現の切替えを引き起こした。また、酵母由来Ste2の代わりにヒト由来GPCRであるセロトニン受容体(HTR1A)を用いた場合でも同様に、HTR1Aのホモ二量体形成に応答して2種類の遺伝子発現を切替えることができた。さらに、ヒト由来アドレナリン受容体(ADRB2)を用いた場合、ADRB2同士のホモ二量体形成のみだけでなく、アンジオテンシン受容体(AGTR1)やソマトスタチン受容体(SSTR2)とのヘテロ二量体形成に応答して2種類の遺伝子発現を切替えることにも成功した。これらのことから、Gタンパク質シグナルに応答して遺伝子発現を切り替えることのできるスイッチングゲノム編集技術の確立に成功した。

  • 研究成果

    (9件)

すべて 2016 2015

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 謝辞記載あり 4件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (5件) (うち国際学会 1件)

  • [雑誌論文] Dual-color reporter switching system to discern dimer formations of G-protein-coupled receptors using Cre/loxP site-specific recombination in yeast2016

    • 著者名/発表者名
      Yasuyuki Nakamura, Takamichi Hashimoto, Jun Ishii, Akihiko Kondo
    • 雑誌名

      Biotechnology and Bioengineering

      巻: in press ページ: in press

    • DOI

      10.1002/bit.25974

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Current Techniques for Studying Oligomer Formations of G-Protein-Coupled Receptors Using Mammalian and Yeast Cells2016

    • 著者名/発表者名
      Yasuyuki Nakamura, Jun Ishii, Akihiko Kondo
    • 雑誌名

      Current Medicinal Chemistry

      巻: 23 ページ: 1605-1619

    • DOI

      10.2174/0929867323666160407113353

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Gγ recruitment systems specifically select PPI and affinity-enhanced candidate proteins that interact with membrane protein targets2015

    • 著者名/発表者名
      Misato Kaishima, Jun Ishii, Nobuo Fukuda, Akihiko Kondo
    • 雑誌名

      Scientific Reports

      巻: 5 ページ: 16723

    • DOI

      10.1038/srep16723

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Applications of yeast-based signaling sensor for characterization of antagonist and analysis of site-directed mutants of the human serotonin 1A receptor2015

    • 著者名/発表者名
      Yasuyuki Nakamura, Jun Ishii, Akihiko Kondo
    • 雑誌名

      Biotechnology and Bioengineering

      巻: 112 ページ: 1906-1915

    • DOI

      10.1002/bit.25597

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [学会発表] High-resolution, quantitative analysis for measuring heterogeneities of G-protein signaling at single-cell levels in yeast2015

    • 著者名/発表者名
      Jun Ishii, Akihiko Kondo
    • 学会等名
      The 2015 International Chemical Congress of Pacific Basin Societies (Pacifichem 2015)
    • 発表場所
      Honolulu, Hawaii, USA
    • 年月日
      2015-12-15 – 2015-12-20
    • 国際学会
  • [学会発表] 酵母シグナル伝達を用いた標的膜タンパク質に対するバイオメディカル分子スクリーニングシステム2015

    • 著者名/発表者名
      海嶋美里,福田展雄,石井純,近藤昭彦
    • 学会等名
      第33回イーストワークショップ
    • 発表場所
      せとうち児島ホテル
    • 年月日
      2015-11-13 – 2015-11-14
  • [学会発表] ヒトニューロテンシン受容体のリガンド検出のための酵母バイオセンサーの開発2015

    • 著者名/発表者名
      橋弘樹,中村泰之,石井純,近藤昭彦
    • 学会等名
      第33回イーストワークショップ
    • 発表場所
      せとうち児島ホテル
    • 年月日
      2015-11-13 – 2015-11-14
  • [学会発表] ヒトニューロテンシン受容体におけるリガンド探索のための酵母バイオセンサー2015

    • 著者名/発表者名
      橋弘樹,中村泰之,石井純,近藤昭彦
    • 学会等名
      第67回日本生物工学会大会
    • 発表場所
      鹿児島城山観光ホテル
    • 年月日
      2015-10-26 – 2015-10-28
  • [学会発表] 1細胞スクリーニングに向けたヒトGPCRアッセイ用酵母バイオセンサー開発2015

    • 著者名/発表者名
      橋弘樹,中村泰之,石井純,近藤昭彦
    • 学会等名
      生物工学若手研究者の集い 夏のセミナー2015
    • 発表場所
      タナベ名古屋研修センター
    • 年月日
      2015-07-11 – 2015-07-12

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公開日: 2017-01-06  

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