| 研究課題/領域番号 |
26830118
|
|---|
| 研究機関 | 川崎医科大学 |
|---|
研究代表者 |
越智 宣昭 川崎医科大学, 医学部, 講師 (80611615)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| キーワード | EGFR / ペメトレキセド / 耐性化 |
|---|
| 研究実績の概要 |
本研究では、非扁平上皮・非小細胞肺癌患者への標準治療薬であるペメトレキセドと上皮成長因子受容体（EGFR）遺伝子変異の関係、そしてペメトレキセド耐性機序の解明と、その克服方法について検討するべく、研究を進めている。申請者らがすでに樹立したEGFR遺伝子変異陽性肺腺癌細胞株（PC-9）と野生型EGFR遺伝子を有する肺腺癌細胞株（A549）のペメトレキセド耐性細胞株（PC-9/PEMR, A549/PEMR）について、幾つかの殺細胞性抗がん剤との感受性を検討している。EGFR遺伝子exon21のL858R変異を有する肺腺癌細胞株（H3255）に対して、ペメトレキセドへの感受性（IC50）をMTTアッセイにより決定したのち、十分な低濃度からペメトレキセドの持続曝露を開始した。これまでの同様の検討では数ヶ月かけて徐々にペメトレキセドの濃度を段階的に上昇させ、耐性を誘導することが可能であった。しかしながらH3255に関しては細胞の成長がもともと非常に緩徐であることに加え、わずかなペメトレキセドの濃度上昇によっても容易に死滅してしまう状況が続き、現時点で耐性の誘導に難渋している。引き続き継続すると共に、他のEGFR変異を有する細胞株（H1975；Exon21 L858R変異＋Exon20 T790M耐性化変異）に対しても同様の方法を用いてペメトレキセド耐性を誘導可能か併行して検討を行っている。この性質が細胞種によるものか、EGFR遺伝子変異パターンによるものかを検討する必要がある。我々の樹立したPC-9/PEMR, A549/PEMRにおいては thymidylate synthase(TS)の高発現がペメトレキセド耐性に関与していることから、TS特異的siRNAを用いてそれぞれTS発現を抑制することで、ペメトレキセドへの感受性が回復することを確認した。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
当初想定していたEGFR遺伝子Exon21 L858R変異細胞株であるH3255でのペメトレキセド耐性誘導が予定通り進まず、難渋している。これまで他の細胞株で成功している手法と同様に極低濃度のペメトレキセド曝露から開始し、徐々に濃度を上げていく方法を行っているが、ある濃度を超えると急速に細胞増殖が抑制されてしまう。境界濃度で長期間培養する方法を試行したものの本来の増殖が緩徐であるためか、その濃度を超えての培養に至らない。培養・継代方法をさまざま変更して試行錯誤しているが、本来の増殖が緩徐であることによるものか細胞固有の問題かは不明であるが、耐性獲得に至っていない。
|
| 今後の研究の推進方策 |
現在、当研究室で保有しているH3255細胞株を使用しているが、新たに細胞バンクより購入して検討しなおすことも予定している。また、この性質が本来の目的であるEGFR遺伝子変異型によるものである可能性も否定できないことから、他のEGFR遺伝子変異型を有する細胞株を用いて同様の検討を行っている。
また、過去に耐性細胞株を複数樹立している研究者とミーティングを行い、引き続き耐性株樹立に取り組む予定である。
また、すでに樹立している2種のペメトレキセド耐性細胞株を用いて当初予定している上皮間葉移行（EMT)関連マーカーの検討などを先に進めていく。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
当初予定していた新たなEGFR遺伝子変異を有するペメトレキセド耐性細胞株の樹立が遅れており、引き続き予定していた研究が遂行できていないためである。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
研究補助員への人件費にある程度当てることで、研究の遂行に支障が無いように配慮する予定である。そのため、当初の予定では組み入れていなかった人件費に次年度は予算を配分する予定である。
|
