| 研究実績の概要 |
Wilms's tumor-1 associating protein(WTAP)は、核質および核スペックルに局在しており、Virilizer, KIAA0853, Hakai, BCLAF1, THRAP3, RBM15等のRNA結合タンパク質と複合体を形成し、オルタナティブスプライシングおよび細胞増殖に関与しているが、その機能の詳細については不明な点が多い。WTAPはショウジョウバエの性決定に関わるスプライシング調節因子female lethal 2d (fl(2)d)のホモログであり、fl(2)dはSXLおよびvirilizerと協調してSXL遺伝子自身のオルタナティブスプライシングを調節している。我々は、哺乳類細胞におけるWTAPのターゲットRNAを同定する目的で、WTAPおよびvirilizer をノックダウンした細胞を用いてRNA seqを行った。WTAPのノックダウンにより、約250の遺伝子について5倍以上の発現変動が見られ、GO termでcell cycleに関係するものが最もenrichされており、以前報告したmicroarrayのデータと合致していた。また、オルタナティブスプライシングを同定するために、MapSpliceを用いて解析した。コントロールの細胞で60%以上のエクソンスキップが見られ、かつWTAPのノックダウンによりエクソンスキップが1.5倍以下になるもの、また、コントロールの細胞では40%以下のエクソンスキップであるが、WTAPのノックダウンにより1.5倍以上になるもの、それぞれ、34eventsと14eventsを同定した。今後はターゲットのバリデーションおよび調節メカニズムを解析する予定であり、ショウジョウバエでの性決定のスプライシング調節機構が、哺乳類細胞ではどの細胞機能に関連しているのか検討する。
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