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本研究は、【伸長tRNA (eMet)の細胞内での動きをリアルタイムに観察するための手法を開発し、eMetの核内、nSBsへの移行を追跡する】、【eMetの核内、tRNA顆粒への輸送因子を同定する】ことを目的として、研究を進めています。その中で本年度は下記の課題を実施しました。
(1) eMetの観察法の開発
RNaseHに切断されることで効率良く蛍光を発するDNA/RNAハイブリッド(DRhetero)の配列が明らかになりました。また、molecular beacon (MB)を用いてeMetを検出するために、eMetのターゲット部位を最適化した結果、修飾が入った成熟したeMetの検出も可能であることが明らかになりました。
(2) tRNA顆粒形成因子の同定
tRNA顆粒と共局在するnuclar stress bodies (nSBs)構成タンパク質をノックダウンすることでtRNA顆粒の形成及びnSBsの形成が抑制されることが明らかになりました。また、mammalian target of rapamycinがtRNAの核内蓄積に重要であることが明らかになりました。
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