| 研究課題/領域番号 |
26840113
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
松崎 仁美 筑波大学, 生命環境系, 助教 (50436242)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | エピジェネティクス / ゲノム刷り込み / DNAメチル化 |
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| 研究実績の概要 |
Igf2/H19遺伝子座では、制御領域「H19 ICR」が父由来アリルのみでDNAメチル化されることで、刷り込み遺伝子発現がおこる。その破綻は、シルバーラッセル症候群などのゲノム刷り込み病の原因の一つとされている。そこで、本研究は、同領域のアリル特異的なDNAメチル化の分子メカニズムを明らかにすることを目的とし、特に、我々が見出した受精後の新規DNAメチル化活性に焦点をあてて、遺伝子改変マウスを用いて解析をおこなっている。
前年度までに、末端から段階的に配列を欠損させた一連のH19 ICR断片を導入したトランスジェニックマウスを作製・解析し、父由来H19 ICRを受精後メチル化するための制御候補配列を百数十bpの範囲に絞り込んだ。そこで、本年度は、CRISPR/Casゲノム編集法によって、同配列を内在およびトランスジーンのH19 ICRから内部欠損させたマウスを作製することで、そのメチル化制御における必要性の検証をすすめた。さらに、同百数十bpの中の一部配列のみを欠損させたマウスも複数系統作製し、最小責任配列の同定を試みた。
これらのノックアウトマウスのDNAメチル化状態を、出生後の体細胞において解析した結果、複数の制御配列が協調してH19 ICRの父由来メチル化を制御する可能性が見出された。同時に、DNAメチル化および発現制御に対する同配列の作用を、受精後胚発生の各段階で詳細に解析することが重要と考えられる結果が得られた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
複数のノックアウトマウス系統の作製に成功し、H19 ICRの父由来特異的DNAメチル化を制御するシス配列の解析をすすめることができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
作製したH19 ICR内制御配列ノックアウトマウスの胚発生段階を追って、DNAメチル化状態と刷り込み遺伝子発現量の変化を解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
遺伝子改変マウスの管理・維持と解析を、当初予定していた金額よりも縮減し、効率的に行うことができた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
さらに詳細に分子メカニズムを明らかにするために、各発生段階の胚を得るのに必要な野生型マウスと、DNAメチル化・遺伝子発現解析に用いる試薬・消耗品を購入する。
また、得られた成果を学会で発表するための旅費として使用する。
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