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2015 年度 実績報告書

環境核酸の分析による生物量推定法の高精度化および代謝量推定への応用に向けた新展開

研究課題

研究課題/領域番号 26840152
研究機関龍谷大学

研究代表者

山中 裕樹  龍谷大学, 理工学部, 講師 (60455227)

研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2016-03-31
キーワード生物量 / 代謝量 / 環境核酸 / 環境評価 / 測定精度
研究実績の概要

近年、水棲生物が環境中へと放出している遺伝物質が生物の分布や生物量の推定に利用されるようになった。ただ、その放出速度に対する環境条件の影響や水中での存在時間等については不明な点が依然多く、水産業等への実用化の障壁となりつつある。本研究ではこの分析技術の信頼性や実用性を高めるため、対象生物の生物量や代謝量をより高精度に非接触で推定しうる基礎技術を開発することを目的とした。試料水中に含まれるDNA(環境DNA)は採水直後から急激に分解することがこれまでに研究で明らかになっている。これは環境DNA分析の信頼性にとって大きな問題であり、現場で即時に濾過を行うことで問題を解消することとした。これを実現するために車載して利用可能な12Vで稼働するろ過システムを新規に開発し、採水後速やかに濾過を行って、フィルターを冷凍保存するという系を確立した。ブルーギル由来の環境DNAを対象として分析したところ、常温で6時間インキュベートした試料水と比較して、約3倍量のDNAが検出された。この現場ろ過システムとその効果については国際学会で報告した。一方で、環境水中に含まれるRNA(環境RNA)についてもその測定値に想定していた以上の大きなばらつきが生じることが明らかとなった。これは環境DNAと同じく、さまざまなサイズで構成される環境RNAを含む粒子(細胞や組織片)が試料水中にどのようなサイズ分布で補足されるかという確率的な問題から生じていると考えられた。まだこのばらつきを解消するには至っていないが、継時的な環境RNAの分解を測定した実験からは水棲生物から放出された環境RNAが予想に反して24時間ほど経過してもまだ定量可能なだけ残存することが示唆されており、ばらつきの低減策を開発すれば環境RNAを測定して生物の活動状況を知る手がかりを分析可能であることが明らかになった。

  • 研究成果

    (7件)

すべて 2016 2015 その他

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (4件) (うち国際学会 1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] The use of environmental DNA of fishes as an efficient method of determining habitat connectivity.2016

    • 著者名/発表者名
      Hiroki Yamanaka, Toshifumi Minamoto
    • 雑誌名

      Ecological Indicators

      巻: 62 ページ: 147-153

    • DOI

      10.1016/j.ecolind.2015.11.022

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Effects of water pH and proteinase K treatment on the yield of environmental DNA from water samples.2016

    • 著者名/発表者名
      Satsuki Tsuji, Hiroki Yamanaka, Toshifumi Minamoto
    • 雑誌名

      Limnology

      巻: - ページ: -

    • DOI

      10.1007/s10201-016-0483-x

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [学会発表] 魚類からの環境RNA放出速度と温度依存性2016

    • 著者名/発表者名
      垣見直希, 河野吉将, 山中裕樹
    • 学会等名
      第63回日本生態学会大会
    • 発表場所
      仙台
    • 年月日
      2016-03-20 – 2016-03-24
  • [学会発表] 種特異的プライマーセットとリアルタイムPCRによる魚類の分布推定2016

    • 著者名/発表者名
      山中裕樹,櫻井翔,本澤大生,本郷真理,辻冴月
    • 学会等名
      第63回日本生態学会大会
    • 発表場所
      仙台
    • 年月日
      2016-03-20 – 2016-03-24
  • [学会発表] 環境DNA分析におけるリアルタイムPCRとデジタルPCRの検出率の比較2016

    • 著者名/発表者名
      十河勇樹,土居秀幸,山中裕樹
    • 学会等名
      第63回日本生態学会大会
    • 発表場所
      仙台
    • 年月日
      2016-03-20 – 2016-03-24
  • [学会発表] On site filtration of water samples for environmental DNA analysis to avoid DNA degradation during transportation.2015

    • 著者名/発表者名
      Hiroki Yamanaka, Hiromu Motozawa, Satsuki Tsuji, Ryohei C Miyazawa
    • 学会等名
      British Ecological Society 2015 Annual Meeting
    • 発表場所
      Edinburgh, Scotland
    • 年月日
      2015-12-13 – 2015-12-16
    • 国際学会
  • [備考] Yamanaka's Web Site

    • URL

      http://www.est.ryukoku.ac.jp/est/yamanaka/index.html

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公開日: 2017-01-06  

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