| 研究実績の概要 |
グルコースの6位水酸基がアシル化された糖エステル化合物である6-チューリッポシド（Pos）A, Bはチューリップの主要二次代謝産物であり、チューリップ組織内在のPosA変換酵素およびPosB変換酵素によって、ラクトン化体である抗菌活性物質チューリッパリン（Pa）A, Bへとそれぞれ変換される。本研究ではこれまで明らかにされていない6-Pos類の生合成経路のうち、グルコースのアシル化プロセスの解明を目指した。チューリップの葉から調製した粗酵素を用いて、想定される6-Pos生合成酵素活性を検出するため、これまでに同定済みのPosA変換酵素およびPosB変換酵素に対する抗体を反応系に加え、Pos変換酵素を不活化する条件を検討したところ、PosB変換酵素の不活化ができないという問題が生じた。この原因として、葉では同定済みPosB変換酵素以外のアイソザイムが発現していることが想定されたことから、その同定を試みた。
PosB変換酵素活性が高い生育初期の葉から粗酵素を調製後、各種カラムクロマトグラフィーを経ることで、葉のPosB変換酵素を均一に精製した。さらに、精製酵素の部分アミノ酸配列解析の後、当該酵素遺伝子cDNAを新たに単離、同定した。その配列は、先に花粉および根から単離されたPosB変換酵素遺伝子とは異なるものであった。本遺伝子の組織別発現様式を調べたところ、本遺伝子は葉を含む複数の組織で発現していることが分かった。このことから、当初の予想通り、葉では花粉や根とは異なるPosB変換酵素アイソザイムが主に発現していることが明らかとなった。
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