| 研究実績の概要 |
①RNAi導入ヒト膵癌細胞株の樹立：Primary cilia高発現株としてPANC-1，低発現株としてMIAPACA-2を選択した．shRNAを用いて，Primary cilia形成に関わるIFT88もしくはKIF3Aを抑制したクローンを作製した．血清飢餓状態のPrimary ciliaの発現率はempty vector群(非抑制群)の38%に対して，抑制群(IFT88,KIF3A)ではそれぞれ16%，0%と，発現抑制を確認した．MIAPACA-2ではいずれにもprimary ciliaを認めなかった．両細胞株とも非抑制群ではオリジナルの細胞同様に円形・紡錘形の二相性を呈したが，抑制群では全体が紡錘形を呈した．
②Primary ciliaの発現と増殖能の検討：抑制群も通常の細胞培養(3日以内)では増殖能は同程度であった．
③移植マウスモデル内でのin vivo動態：NOD/SCIDマウスの膵に細胞を移植した8週後に，生着率・腫瘍径・転移数を計測した．両細胞株とも抑制群では有意に生着率・腫瘍径が小さかった．転移はいずれにもみられなかった．
④In vitro特殊培養：polyHEMA coating slideを用いた非接触培養下で、PANC-1の抑制群はcolony形成速度が遅く，結合性も弱くなっていることが確認された．MIAPACA-2は抑制の有無にかかわらず，colonyの形成能がほとんどみられなかった．この結果はPrimary ciliaの発現率とよく相関していた．Nanoculture Plate(Sclvax)を用いた3D培養で，PANC-1は同様の結果であった．MIAPACA-2非抑制群でもわずかなcolony形成能がみられたが，抑制群では減弱していた．これらのcolony形成能の違いがin vivoにおける腫瘍形成能に関与している可能性があると考えられた．
|
