タンパク質架橋化酵素を標的とした肝線維化の病態機序の解明および制御法の開発

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26860500
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 辰川 英樹 名古屋大学, 創薬科学研究科, 助教 (10565253)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: トランスグルタミナーゼ / タンパク質架橋化酵素 / 肝線維化 / 肝硬変 / ALDH2 / Cytokeratin-18

研究実績の概要

肝線維症の病態進展に伴うタンパク質架橋形成の存在と機構解明を目指し、肝線維化動物モデルを用いて、平成27年度は以下の2点の研究課題を遂行した。
（１）昨年度に得られたTG1およびTG2の活性上昇が見られる組織分布の情報に基づき、蛍光免疫染色により細胞種の特定を行った。また下記に示すが、新規に得られた肝線維化の形成過程に関わる基質タンパク質に対する抗体を用いて、免疫染色を行うことにより、TG活性の基質の分布について共染色により明らかにした。
（２）正常及び線維化を誘導した肝組織抽出液（胆管結紮処置3、7、14日後）とビオチンを付けた各TGアイソザイム選択的な基質ペプチドを反応させ、アビジン精製後にトリプシン消化を行い、質量分析を用いて解析した。その結果、ALDH2およびCytokeratin-18が線維化の進行に伴い架橋される基質であることが分かった。Cytokeratin-18は細胞死に関わることがすでに報告されているため、肝線維化誘導時の肝細胞死の誘導機構に寄与することが示唆される。

研究成果

• [雑誌論文] Distribution of transglutaminase family members in mouse whole body sections. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tatsukawa H, Abe N, Ohashi S, Hitomi K.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 467 ページ: 1046-51
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2015.10.001.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Early response as shown by enhancement of transglutaminase 1 expression after cisplatin-induced acute kidney injury. (2015)
  • 著者名/発表者名: Furukawa K, Yamane M, Tatsukawa H, Hitomi K.
  • 雑誌名: Arch Biochem Biophys. 巻: 586 ページ: 27-32
  • DOI: 10.1016/j.abb.2015.09.021.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Biochemical Characterization of Medaka (Oryzias latipes) Transglutaminases, OlTGK1 and OlTGK2, as Orthologues of Human Keratinocyte-Type Transglutaminase. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kikuta A, Furukawa E, Ogawa R, Suganuma N, Saitoh M, Nishimaki T, Katsumura T, Oota H, Kawamoto T, Tatsukawa H, Hashimoto H, Hitomi K.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 10 ページ: e0144194
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0144194.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] 腎線維化組織において架橋修飾されるタンパク質群の網羅的解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大津里紗、谷優治、辰川英樹、人見清隆
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [学会発表] 腎臓の線維化進行に伴うタンパク質架橋化修飾の役割 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大津里紗、谷優治、脇田峻資、辰川英樹、人見清隆
  • 学会等名: 2015年度日本農芸化学会中部・関西支部合同大会
  • 発表場所: 富山県立大学
  • 年月日: 2015-09-19 – 2015-09-20
• [図書] Transglutaminase：Multiple Functional Modifiers and Targets for New Drug Discovery - Preferred Substrate Structure of Transglutaminases. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hitomi K and Tatsukawa H.
  • 総ページ数: 20
  • 出版者: Springer