| 研究実績の概要 |
1.正常および変異型強制発現細胞株の樹立
遺伝子の完全長cDNAクローンー005630.1を哺乳類細胞発現べクターpCMV6-ACにサプクローニングした.完成した正常型の発現べクターに対して各変異型になるよう設計したプライマーによるinversePCRを行うことで患者に認められる全ての変異型の発現べクターを作製た.Humanembryonickidney293(HEK293)培養細胞に遺伝子導入試薬を用いてこれらべクターをトランスフェクションし、48時間培養後実験に供した.
2.強制発現株を用いた正常およひ変異型SLC02A1のPGE輸送機能の解析
正常および変異型SLCO2A1遺伝子を発現させたHEK細胞に,3H標識されたPGEを取り込ませ,一定時間培養後に細胞を溶解して液体シンチレータと混合,液体シンチレーションカウンター(パーキンエルマーTri-Carb3100)で放射線をカウントすることでPGEの輸送能を測定した.正型遺伝子を発現させたHEK細胞と比較して,変異型SLC02A1遺伝子を発現させたHEK細胞では著しくPGEの輸送能が低かった.
3.Cre-loxPシステムを用いた血管内皮特異的slco2a1欠損マウスの作製KnockoutMouseProject(KOMP)RepositoryよりKOMP-CSD ID:79483を人手し,loxP系統を得た.これをVE-Cadherin-Cre系統と交配中である.血管内皮特異的slco2a1欠損マウス系統を樹立した.
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