高親和性IgE抗体産生細胞の発生機序の解明とこれを用いた予防への応用研究

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26860806
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 亀村 典生 徳島大学, 生物資源産業学部(仮称)設置準備室, 助教 (10632656)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 抗原特異的IgE / アレルギー

研究実績の概要

高親和性IgE抗体産生細胞の発生機序の解明に関して、1、 クラススイッチをモニタリングができる測定法の確立、2、 生後の低親和性特異的抗体の検索の2つの研究を行った。特異的IgEの産生機序の解明を行うため、クラススイッチをモニタリング出来る測定法の確立を目指し、研究を行った。血液採取の期間は、免疫療法前、免疫療法後、維持期三ヶ月後、6ヶ月後、12ヶ月後（計27名）採取し、Densely carboxylated protein (DCP) チップ法で測定した。抗原特異的IgG1、IgG3の抗体価は免疫療法後において増加し、治療の維持期の経過とともに抗体価が減少した。IgG2の抗体価は免疫療法後において増加し、維持期の経過とともに増加し、維持期12ヶ月にまで維持された。IgGサブクラスの中で最後に産生されるIgG4の抗体価は免疫療法後増加し、明らかに維持期の経過とともに増加した。IgAに関しては免疫療法後から増加した。IgEに関しては免疫療法後、減少した。IgM→IgG→IgEへのクラススイッチが高親和性抗体産生の機序とされているが、IgG→IgG4のクラススイッチの経路が優位に高くなっており、その結果IgE産生が抑制されていることが示唆された。これらの結果からDCPチップ法により、抗体クラススイッチのモニタリングが可能となった。生後、低親和性特異的IgEが産生されるのか、生後14ヶ月（健常児）の検体を用い、DCPチップ法により検証を行った。結果、低親和性特異的IgEが数名において検出された。低親和性特異的IgEがアレルギー発症に関与するのか今後の課題である。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

高親和性IgE抗体産生細胞の発生機序の解明に関して、臍帯血から低親和性特異的IgE産生細胞を精製、培養し、その後、高親和性IgE抗体産生細胞が産生されるか実験計画を立てた。しかし、臍帯血から低親和性特異的IgE産生細胞を精製することは、臍帯血の入手が困難であること、臍帯血が採取できたとしても特異的IgEを産生している検体が少ないこと、さらに低親和性特異的IgE産生細胞を精製するための検討が不十分であり（さらに詳細に検討する必要がある）、これらの理由により現段階では困難である。今後は、人の臍帯血にこだわらず、低親和性特異的IgE産生細胞を精製するための検体が一定に維持できる方法で、研究を行う予定である。

今後の研究の推進方策

低親和性特異的IgE産生細胞を精製するための検体が一定に維持できる方法を確立するため、動物実験を行う。この度の実験では、ラットを用いて研究を遂行する予定である。ラットの胎児が低親和性特異的IgEを産生する環境を検討し、ラットの新生児から親和性特異的IgE産生細胞を精製する。母体が食物抗原に対する特異的IgEを産生する場合、胎児が母体と同じ特異的IgEを産生する割合が多いため、アレルギーラットの母体を作成し、交配させ、アレルギーモデルラットの家族を作成する予定である。

次年度使用額が生じた理由

26-27年度は、高親和性IgE抗体産生細胞の発生機序の解明に関して、臍帯血から低親和性特異的IgE産生細胞を精製、培養し、その後、高親和性IgE抗体産生細胞が産生されるか実験を行う予定であった。しかし、臍帯血から親和性特異的IgE産生細胞を精製することは、臍帯血の入手が困難であること、臍帯血が採取できたとしても特異的IgEを産生している検体が少ないこと、さらに親和性特異的IgE産生細胞を精製するための検討が不十分であり（さらに詳細に検討する必要がある）、これらの理由により、研究計画と少しのズレがあり、次年度に使用額が生じた。

次年度使用額の使用計画

低親和性特異的IgE産生細胞を精製するための検体が一定に維持できる方法を確立するため、次年度使用額が生じた費用により、アレルギーモデルラットの作製を行いたいと考えている。

研究成果

• [雑誌論文] Measurement of allergen-specific secretory IgA in stool of neonates, infants and toddlers by protection against degradation of immunoglobulins and allergens (2015)
  • 著者名/発表者名: Norio Kamemura, Miwa Takashima, Hideaki Morita, Kenji Matsumoto, Hirohisa Saito, and Hiroshi Kido
  • 雑誌名: J Med Invest 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Application of Moisturizer to Neonates Prevents Development of Atopic Dermatitis and Allergic Sensitization (2014)
  • 著者名/発表者名: Kenta Horimukai, Kumiko Morita, Masami Narita, Mai Kondo, Hiroshi Kitazawa, Makoto Nozaki, Yukiko Shigematsu, Kazue Yoshida, Hironori Niizeki, Ken-ichiro Motomura, Haruhiko Sago, Tetsuya Takimoto, Eisuke Inoue, Norio Kamemura, Hiroshi Kido, Junzo Hisatsune, Motoyuki Sugai, Hiroyuki Murota, Ichiro Katayama
  • 雑誌名: J Allergy Clin Immunol. 巻: １３４ ページ: 824-830
  • DOI: 10.1016/j.jaci.2014.07.060
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] 新規蛋白チップによる臍帯血特異的IgEの検出と、離乳完了期までに見られるIgE抗体の低親和性から高親和性への変化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 亀村典生
  • 学会等名: 日本小児アレルギー学会
  • 発表場所: 四日市市文化会館（三重県四日市市）
  • 年月日: 2014-11-08 – 2014-11-09
• [学会発表] 臍帯血中の抗原特異的Low Affinity IgEの検出と生後High Affinity IgEへの変化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 亀村典生
  • 学会等名: 日本生化学大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館(京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-15 – 2014-10-18