2014 年度実施状況報告書

新生児慢性肺疾患の重症化に関わるマイクロＲＮＡの同定と臨床応用への検討

研究課題

研究課題/領域番号	26860850
研究機関	福島県立医科大学
研究代表者	郷勇人福島県立医科大学, 医学部, 助教 (30443857)
研究期間 (年度)	2014-04-01 – 2017-03-31
キーワード	miRNA / 高濃度酸素暴露 / 新生児慢性肺疾患 / Exosome
研究実績の概要	本研究の目的は、まだ明らかにされていない慢性肺疾患の発症や重症化のメカニズムについて、マイクロRNA（以下miRNA）に重点をおき、新生児慢性肺疾患罹患児の臨床検体と新生仔慢性肺疾患モデルを用いて、発症や重症化に関わる標的miRNAとメッセンジャーRNA(以下mRNA)を同定することと標的miRNAの促進剤（mimic）,阻害剤（inhibitor）を本疾患モデルマウスに投与し、その効果を分子生物学的、呼吸生理学的、病理組織学的に検討することである。平成26年度は、本疾患の重症化モデルマウスを作製した。高濃度（95％）酸素を168時間暴露したモデルマウス肺をHE染色し、Radial Alveolar Count(RAC)を行い、コントロール群（非酸素暴露群）に比べ、有意にRACが減少していることを確認した。また、高濃度酸素暴露群とコントロール群のマウス肺からtotal RNAを抽出後、バイオアナライザ2100を用いて、RNA Integrity Number(RIN)を測定し、質の良好なRNAを抽出できたことと、miRNAも抽出されていることを確認した。臨床検体については、福島県立医科大学の倫理委員会の承認を得た後に、当院NICUに入院した児の臍帯血の血清と児の血清を-80℃で保存しはじめた。一部の検体を用いて、血清からExosomeの抽出を行い、Exosomeに特異的に発現しているCD9、CD63などの蛋白をウェスタンブロッティングにより検出し得たを確認した。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由研究がやや遅れている理由としては、新生児の検体からのExosome抽出の確認のため行ったウェスタンブロッティングに予想以上の時間を費やしたことと、臨床検体において目標としている検体数に達していないことである。
今後の研究の推進方策	現在は新生児血清からのExosome抽出はできていることは確認でき、検体数も目標に到達しつつあるので、平成２７年度中にマウス肺と新生児の血清を用いてmiRNAアレイ解析を行い、標的miRNAを同定していく予定である。
次年度使用額が生じた理由	当初は、アレイ結果ののデータ解析を県外で行う際の交通費に使用する予定であったが、アレイ解析が次年度に塩基となったため。
次年度使用額の使用計画	アレイ解析を次年度に行う際の交通費に使用する。