研究課題/領域番号 |
26860901
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研究機関 | 日本大学 |
研究代表者 |
葉山 惟大 日本大学, 医学部, 助教 (40647187)
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研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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キーワード | マスト細胞 / L型カルシウムチャネル / 蕁麻疹 |
研究実績の概要 |
現在までにマウスとラットのマスト細胞においてL型カルシウムチャネル(LTCC)が発現し、ロイコトリエン、サイトカインの産生やアポトーシスの抑制に関与することが報告されている。しかしながら現在までの研究ではラットのマスト細胞セルラインやマウスの骨髄由来マスト細胞しか用いておらず、ヒトマスト細胞におけるLTCCの役割はいまだ不明である。本研究では主にヒト皮膚マスト細胞におけるLTCCの役割を解明し、蕁麻疹を中心としたマスト細胞の関与する疾患における役割を調べる。 昨年度までにヒトマスト細胞にLTCCが発現しているかを、LTCCの機能ユニットであるα2δサブユニットに対する抗体を用いて調べた。その結果、ヒト皮膚マスト細胞にL型カルシウムチャネルが発現していることが分かった。平成27年度はさらにL型カルシウムチャネルの機能を調べるためにヒトマスト細胞を用いて実験を行った。当初は皮膚マスト細胞を使用する予定であったが、十分な量を採取できなかったため、まずは皮膚マスト細胞を性質の似ている関節滑膜より培養した滑膜マスト細胞を使用した。LTCC選択的阻害薬であるニフェジピンを使用してマスト細胞の脱顆粒実験を行った。その結果、細胞毒性のない濃度(100μM以下)のニフェジピンはマスト細胞の脱顆粒に影響を与えないことが分かった。これはマウスの培養マスト細胞と同様の結果であった。次年度は皮膚マスト細胞で同様の実験を行う。さらにマウスではLTCCが影響するサイトカインの産生への関与を調べる。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
昨年度と同様に皮膚マスト細胞を用いて実験する予定であったが、皮膚移植術の過剰検体からとれる皮膚はわずかであり、それから8~12週の培養を経て得られる皮膚マスト細胞はさらに少なくなる。少ないマスト細胞を有効活用するためにはあらかじめ実験条件を策定することが望ましい。そのため本年度は他の組織から得られるマスト細胞のうち比較的皮膚マスト細胞に性質が近い滑膜マスト細胞を用いて実験を行った。
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今後の研究の推進方策 |
滑膜マスト細胞を用いて、脱顆粒などの実験条件を検索した。その結果、滑膜マスト細胞ではLTCC阻害薬であるニフェジピンは脱顆粒に影響を与えないことが分かった。この結果はマウスのマスト細胞で得られて結果と矛盾しない。今後は皮膚マスト細胞を用いてLTCC阻害薬がマスト細胞の脱顆粒に及ぼす影響を調べる。またサイトカインの産生においてはIL-13やTNF-αにおいてLTCC阻害薬が影響を与えることが分かっている。ヒト皮膚マスト細胞においても同様の結果となるかを調べる予定である。
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次年度使用額が生じた理由 |
今年度は皮膚マスト細胞を十分量確保することができなかったため、代わりに滑膜マスト細胞を使用し実験を行った。そのため研究に遅延が生じ、予定使用額に達しなかった。
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次年度使用額の使用計画 |
滑膜マスト細胞を用いた研究にて脱顆粒実験などの実験条件が分かったので、今後は皮膚マスト細胞を用いて研究する。また今年度も昨年度と同様に皮膚マスト細胞の不足が予測されるので、サイトカインの産生実験も滑膜マスト細胞で条件を検索してから皮膚マスト細胞で行うこととする。また同時に皮膚炎症性疾患の患者の皮膚生検検体の皮膚マスト細胞においてL型カルシウムチャネルの発現が亢進していないかを調べる。
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