| 研究課題/領域番号 |
26860908
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| 研究機関 | 産業医科大学 |
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研究代表者 |
山口 卓 産業医科大学, 医学部, その他 (40634374)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 有棘細胞癌 / AID |
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| 研究実績の概要 |
皮膚組織パラフィン切片を遺伝子変異誘導蛋白AID(activation-induced deaminase)に対する抗体を用いて免疫組織化学を行う方法をまず検討した。抗体はインビトロゲン社よりマウス抗ヒトAIDモノクローナル抗体（クローンZA001）を購入した。パラフィン切片をキシレン、エタノールで脱パラフィン処理を行い、pH6.0の抗原賦活用バッファー中で１５分間オートクレーブし、抗原を賦活化した。リン酸緩衝生理食塩水PBS(Phosphate buffered saline)で洗浄した後、過酸化水素水で５分間ブロッキングを行い、リン酸緩衝生理食塩水PBSで洗浄した。５０倍希釈した抗ヒトAIDモノクローナル抗体（クローンZA001）と３７度で１時間反応させた。リン酸緩衝生理食塩水PBSで洗浄した後、シンプルステイン（ニチレイバイオサイエンス）を３０分間反応させ、リン酸緩衝生理食塩水PBSで洗浄した。蒸留水で１分間流水水洗し、マイヤーのヘマトキシリンで染色を行った後、流水水洗を１０分行い、封入を行った。この染色法の結果、陽性コントロールであるリンパ節は陽性に染色され、陰性コントロールである一次抗体に抗ヒトAIDモノクローナル抗体を用いない染色では組織は染色されなかった。また、組織中のメラノファージなどとの区別のためアルカリフォスファターゼの付いた２次抗体と基質であるファーストレッドを用いたところ、赤色にも染色された。有棘細胞癌の組織をこれらの免疫染色法で染色したところ、AIDが発現している症例と発現がほとんど観察されない症例に分類され、予後について追跡調査を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
抗ＡＩＤ抗体による免疫組織化学法の方法が確立したため
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| 今後の研究の推進方策 |
有棘細胞癌の抗ＡＩＤ抗体による免疫組織染色を行い、予後との関係などを検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成２６年度には免疫組織化学法が予定より順調に確立されたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成２７年度にはさらに有棘細胞癌の組織を使いＡＩＤの癌における役割を明らかにする。
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