研究課題
現在、去勢抵抗性前立腺癌（CRPC）に対する有効な治療法は限られており、これらの治療法も長くは奏効しないことから、CRPC発生機序に基づく新たな治療法の確立が待たれる。我々は、これまでmiRNAに着目し、新たな分子標的治療法およびバイオマーカーの確立を目指して、前立腺癌におけるmiRNAの探索とそれらmiRNAによる癌の進展機序の解明を行ってきた。本研究では、アンドロゲン除去環境におけるmiRNAの発現および機能を網羅的に解析し、CRPCにおけるKey moleculeとなるmiRNAを同定するとともに、miRNAを中心とした新たなCRPC発症メカニズムを解明し、有効な補助療法確立にむけた病態解明を行った。１）当研究室にて樹立したCRPCモデル細胞株（LNCaP-AI）を用いたmiRNAの網羅的発現解析により、親株であるLNCaPに比較して発現が増加または低下している複数のmiRNAを見出した。また、これらのmiRNAの発現量をqPCRで解析し、LNCaP-AIにおいて有意に発現異常が認められるmiRNAを同定した。２）同定されたmiRNAの発現ベクターをLNCaPに遺伝子導入し、アンドロゲン除去培養液中で培養し、増殖能を測定したところ、ある特定のmiRNAにおいて細胞増殖能が亢進することを見出した。３）このmiRNAの臨床検体における発現量を定量するためにCRPCの骨転移組織（n=8）における発現量をqPCRにおいて測定したところ、他の前立腺癌組織（n=56）よりも有意に発現が増加していることを見出した。４）同定されたmiRNAの発現ベクターをLNCaPに遺伝子導入したところ、AR、PSAタンパクの発現が増加することを見出した。５）同定されたmiRNAの標的遺伝子の１つとしてNCOR2を同定した。
2: おおむね順調に進展している
これまでの研究から、CRPCにおけるアンドロゲン非依存性増殖に関わるmiRNAを同定し、その機能について詳しく解析してきた。その結果、同定したmiRNAがARやPSAタンパクの発現を増加させることを新たに見出しており、研究はおおむね計画通りに進展している。
我々はin vitroにおける実験系において、アンドロゲン非依存性増殖に関与するmiRNAを同定した。また、各種分子生物学的手法により、その詳細な分子メカニズムが明らかになってきた。今後は、マウスを用いたin vivoにおける実験において、さらなる機能解析を行う予定である。
本年度行ったmiRNAの標的分子候補の探索において、各種データベース上で公開されている発現情報からフィルタリングを行うことによって、相当数の候補分子を絞り込むことができた。そのため、その後の遺伝子発現やタンパク発現などの実験で使用する予定であったプライマーや抗体の購入費を抑えることができた。
本年度は、各種生化学実験を行ってきた。次年度には、in vivoにおける機能機能解析を行い、研究の総括を行うとともに、得られた研究成果を論文発表や学会発表を通して広く社会・国民に発信する。
すべて 2015
すべて 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (1件)
Oncotarget
巻: 6(31) ページ: 32169-32176
10.18632/oncotarget.5081.
