| 研究課題/領域番号 |
26861289
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
井上 剛志 奈良県立医科大学, 医学部, 研究員 (30719539)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 膀胱癌 / がん幹細胞 / 上皮間葉転換 / BCG |
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| 研究実績の概要 |
1)BCG処理によるがん幹細胞およびEMT関連遺伝子群の変化:膀胱癌細胞株T24(高悪性癌)とUMUC3(EMT形質)を対象とし、BCG時間処理後の遺伝子発現を検討した。T24においては、SOX2、OCT3/4、Nanog、SIP1、TWIST、Snailの発現はBCG処理後に低下した。UMUC3においてはSOX2、OCT3/4、Nanog、Snailの発現が上昇した。UMUC3はT24と比較し、BCGに対する抵抗性を示す為、BCG処理後に発現が上昇する遺伝子群から、がん幹細胞の絶対数が多いことが類推される。BCG処理後に残存する細胞をスフェロイドコロニー法で再培養を行ったところ、コロニー形成細胞数はUMUC3で著明に多かった。しかし、これらの細胞の絶対数が少ないことから、遺伝子発現定量に十分なRNAの抽出は困難であり、上記遺伝子群の発現を直接検討することはできなかった。
2)がん幹細胞、EMT関連遺伝子群の発現変化とBCG抵抗性の検討：siRNAを用いてSOX2、OCT3/4をノックアウトし、BCG処理を行うと、T24、UMUC3の両細胞株で著明な抗腫瘍効果を認めた。この抗腫瘍効果は細胞株による差はなく、BCG72時間処理ではほぼ死滅した。したがって、現時点ではがん幹細胞抑制による抗腫瘍効果かどうかは確認できていない。引き続き、他の遺伝子のノックアウトモデルで同様の検討を行い、同時にxenoglaftモデルでも検討を行う。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
SOX2、OCT3/4の発現とBCG抵抗性の関連は示せたが、これらのノックアウトモデルではBCG抵抗性の有無は確認できなかった。またin vivoでの検討をまだ実施できていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
siRNA処理の条件を再検討させることで、BCG処理後に残存する細胞を増加させ、遺伝子発現定量が可能な系を作成する。また臨床試料を用いた免疫染色で、後ろ向きに遺伝子発現と予後の比較検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
DNAメチル化定量に必要なビオチン化プライマーやパイロシークエンスを行っていないため、これらの消耗品を購入していない。
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| 次年度使用額の使用計画 |
引き続き検討を行う。
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