iPS細胞および脱細胞化・再細胞化技術を用いた子宮再構築

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26861340
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 宮崎 薫 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (90445370)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: iPS細胞 / ミュラー管

研究実績の概要

1.ラットinduced pluripotent stem（以下iPS）細胞のクローン化と蛍光タンパク遺伝子導入
ラットiPS細胞をApplied Biological Materials社より購入し，培養・増殖を行った．将来的なin vivoでの非侵襲性解析やcell tracingを鑑み，レンチウィルスベクター（targeting systems社より購入）にてgreen fluorescent protein（以下GFP）遺伝子およびLuciferase遺伝子を導入した．MoFlo XDP（Beckman Coulter社）を使用したFluorescense-activated cell sorting（FACS）にてGFP陽性細胞を分取し，GFP陽性ラットiPS細胞のクローニングに成功した．さらに，GFP陽性ラットiPS細胞を免疫不全マウスに皮下移植し，in vivo imaging system（IVIS；住商ファーマ）を用いた細胞発光の追跡が可能であることを確認した．さらに，6週間後の奇形腫形成を確認した．
2.ラットiPS細胞のミュラー管系統への分化
ラットiPS細胞から子宮を再構築するという最終目標を達成するにあたり，近年報告されている他臓器への多能性幹細胞の分化の知見から，発生生物学に基づき，中胚葉を経由してiPS細胞をミュラー管系統に分化させるのが妥当と判断した．ラットiPS細胞を，各分化段階に応じて培養液中の各種増殖因子などの組成を変えながら培養した．リアルタイムPCRやフローサイトメトリーにて，ラットiPS細胞が中胚葉，中間中胚葉を経てミュラー管系統に分化していることが示唆された．細胞外基質を用いた包埋培養では，分化した細胞が3次元のスフェア構造を形成していた．

研究成果

• [雑誌論文] Endometrial side population cells: potential adult stem/progenitor cells in endometrium. (2015)
  • 著者名/発表者名: Masuda H, Maruyama T, Gargett C, Miyazaki K, Matsuzaki Y, Okano H, Tanaka M
  • 雑誌名: Biol Reprod 巻: 93巻 ページ: 1-8
  • DOI: 10.1095/biolreprod.115.131490.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Cell therapy and tissue engineering from and toward the uterus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Cervello I, Santamaria X, Miyazaki K, Maruyama T, Simon C
  • 雑誌名: Semin Reprod Med 巻: 33巻 ページ: 366-372
  • DOI: 10.1055/s-0035-1559581.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] CD34 and CD49f double-positive and lineage marker-negative cells isolated from human myometrium exhibit stem cell-like properties involved in pregnancy-induced uterine remodeling. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ono M, Kajitani T, Uchida H, Arase T, Oda H, Uchida S, Ota K, Nagashima T, Masuda H, Miyazaki K, Asada H, Hida N, Mabuchi Y, Morikawa S, Ito M, Bulun SE, Okano H, Matsuzaki Y, Yoshimura Y, Maruyama T
  • 雑誌名: Biol Reprod 巻: 93巻 ページ: 1-9
  • DOI: 10.1095/biolreprod.114.127126.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Serum estradiol level during withdrawal bleeding as a predictive factor for intermittent ovarian function in women with primary ovarian insufficiency. (2015)
  • 著者名/発表者名: Miyazaki K, Miki F, Uchida S, Masuda H, Uchida H, Maruyama T
  • 雑誌名: Endocr J 巻: 62巻 ページ: 93-99
  • DOI: 10.1507/endocrj.EJ14-0189.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] 臍部トロッカー挿入時に胃損傷をきたし，腹腔鏡下にて修復し得た1例． (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 薫，佐藤健二，太田邦明，小川誠司，飯野孝太郎，升田博隆，丸山哲夫，末岡 浩，田中 守
  • 雑誌名: 産科と婦人科 巻: 82巻 ページ: 832-835
  • 査読あり
• [雑誌論文] 付属器摘出後より副角に子宮留血症を発症した1例． (2015)
  • 著者名/発表者名: 世良亜沙子，日原華子，升田博隆，三木史恵，宮崎 薫，太田邦明，内田 浩，丸山哲夫，田中 守，青木大輔
  • 雑誌名: 東京産婦人科学会会誌 巻: 64巻 ページ: 390-393
  • 査読あり
• [学会発表] 脱細胞化骨格のトポロジーが再生子宮の組織極性を決める． (2016)
  • 著者名/発表者名: 三木史恵，丸山哲夫，宮崎 薫，升田博隆，内田 浩，田中 守
  • 学会等名: 第15回日本再生医療学会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2016-03-17 – 2016-03-19
• [学会発表] 子宮内膜と子宮内膜幹細胞そして上皮間葉転換． (2016)
  • 著者名/発表者名: 升田博隆，丸山哲夫，宮崎 薫，松崎有未，岡野栄之，田中 守
  • 学会等名: 第37回エンドメトリオーシス学会
  • 発表場所: ホテル日航熊本（熊本県熊本市）
  • 年月日: 2016-01-23 – 2016-01-24
• [学会発表] 古典的帝王切開術後妊娠において限局性疼痛および腹腔内出血を契機に診断に至った穿通胎盤の一例． (2015)
  • 著者名/発表者名: 瀬田康弘, 宮越 敬, 坊岡順香, 宮崎 薫, 落合大吾, 松本 直, 峰岸一宏, 田中 守, 青木大輔
  • 学会等名: 第129回関東連合産科婦人科学会
  • 発表場所: 都市センターホテル（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-06-20 – 2015-06-21
• [学会発表] Non-invasive and real-time assessment of peritoneal lesions generated from human endometrial cell transplants locally accumulated by magnetic force in immunodeficient mice. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tetsuo Maruyama, Hirotaka Masuda, Naoko Hida, Hideyuki Oda, Kaoru Miyazaki, Miki Fumie, Hanako Hihara, Kuniaki Ota, Hiroshi Uchida, Mamoru Tanaka
  • 学会等名: 31th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology (ESHRE).
  • 発表場所: Lisbon, Portugal
  • 年月日: 2015-06-12 – 2015-06-17
  • 国際学会
• [学会発表] Decellularized uterine matrix can promote uterine regeneration in vivo without immune rejection upon allotransplantation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kaoru Miyazaki, Yuki Ueno, Hirotaka Masuda, Hiroshi Uchida, Tetsuo Maruyama
  • 学会等名: International Federation of Fertility Societies / Japan Society for Reproductive Medicine (IFFS / JSRM) International Meeting 2015.
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2015-04-26 – 2015-04-29
  • 国際学会
• [学会発表] 脱細胞化と再細胞化による子宮の再構築． (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 薫，丸山哲夫
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオータニ（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-04-23 – 2015-04-25
  • 招待講演
• [学会発表] 同種異系移植におけるラット子宮脱細胞化マトリックスの免疫原性と再生組織の内分泌学的検討． (2015)
  • 著者名/発表者名: 上野友輝，宮崎 薫，升田博隆，内田 浩，丸山哲夫
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオータニ（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [図書] 三次元ティッシュエンジニアリング ～ 細胞の培養・操作・組織化から品質管理、脱細胞化まで ～ (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 薫，丸山哲夫
  • 総ページ数: 400 (317-321)
  • 出版者: エヌ・ティー・エス