| 研究課題/領域番号 |
26861345
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
藤岡 仁美 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (50410064)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | LH / 中枢性性腺機能低下 / ミクログリア / GnRH |
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| 研究実績の概要 |
機能性視床下部性性腺機能低下はストレスと関連があることが知られている。近年、ストレスによるミクログリアの活性化が、ストレス下での認知・情動の変化に関与することが報告され、ストレス反応へのミクログリアの関与が示唆されている。本研究は、「ストレスによるミクログリアの活性化が性腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)ニューロン機能に影響を与え、黄体形成ホルモン(LH)分泌を抑制する」との仮説を立てこれを検証することを目的とする。
我々は先行研究で、感染ストレス（lipopolysaccharide (LPS)投与）によるLHサージ状分泌抑制が、ミノサイクリン（ミクログリア・マクロファージ活性化抑制作用を持つ）の前投与により減弱することを示した。本年度は、活性化ミクログリアからのGnRHニューロン機能抑制に関与する分子の探索を行った。まず、対照群・LPS投与群・LPS +ミノサイクリン投与群より末梢血を採取し、LPSによる血中サイトカイン上昇に対するミノサイクリンの影響を、EIAサイトカインアレイを用いて検討した。その結果、ミノサイクリンはLPSによる血中サイトカイン濃度の上昇に影響を与えなかった。続いて、対照群・LPS投与群・ミノサイクリン投与群・LPS +ミノサイクリン投与群より脳視床下部視索前野（GnRHニューロン細胞体を多く含む領域）を切り出し、リアルタイムPCR法にて、LPSによるサイトカイン遺伝子発現へのミノサイクリンの影響を検討した。その結果、IL-1βおよびIL-6のLPSによる遺伝子発現上昇がミノサイクリンにより抑制されることが示された。これらの結果より、ミノサイクリンの感染ストレスによるLH分泌抑制減弱作用は末梢ではなく中枢性ものであることを示唆された (第120回日本解剖学会・第92回日本生理学会合同大会にて発表)。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本研究計画では、ミノサイクリンを用いたミクログリア活性化の薬理的抑制モデルと平行して、CD-11b-DTRトランスジェニックマウス（ミクログリア・マクロファージ系細胞特異的にジフテリアトキシン受容体を発現）を用いて、ミクログリアを除去し、LPSによるLHサージ状分泌抑制への影響を検討する実験を計画していた。ジャクソン研究所よりこのマウス購入を予定していたが、輸入代理店経由で送られてきた微生物検査のデータシートに、本学実験動物飼育施設では前例のない微生物 (Klebsiella sp.)が陽性であるとの記載があった。それに対し、本学動物飼育施設側の受け入れ体制を整える必要が生じ、導入が大幅に遅れた。そのため、予定していたCD11b-DTRマウスを用いた実験計画に遅延が生じた。なお、該当動物はすでに本学実験動物飼育施設に導入済みであり、現在繁殖中である。個体数が確保でき次第、実験計画を遂行する予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成27年度は、本年度の研究成果をふまえ、LPSによるLHサージ状分泌抑制に関与する可能性が示唆されたIL-1βとIL-6について、免疫組織化学的手法を用いて、視床下部視索前野における発現部位と発現細胞の同定を行い、ミクログリアがこのIL-1βとIL-6の産生に関与しているのかを明らかにする予定である。
また、CD11b-DTRトランスジェニックマウスの個体数が確保した後、ジフテリア毒素を脳室内投与してミクログリアを後天的に除去した場合、LPS投与によるLHサージ状分泌抑制がどのような影響をうけるのかを、ラジオイムノアッセイを用いて検討する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度の計画では、CD-11b-DTRトランスジェニックマウスを用いて、ミクログリアを除去したモデルを用いた実験を計画していたが、微生物検査のデータシートに本学実験動物飼育施設では前例のない微生物が陽性であるとの記載があり、受け入れ体制を整える必要が生じ、導入が大幅に遅れた。そのため、予定していたCD11b-DTRマウスを用いた実験計画に遅延が生じた。それに伴い、実験計画で使用するため購入を予定していた、ジフテリア毒素・脳室内投与用のガイドカニューラ・脳固定装置のマウス用アダプター等の購入を次年度に繰り越したため、次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成27年度年初に、平成26年度繰越予算で上記実験に使用する予定であった試薬、備品等を購入する予定である。
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