研究課題/領域番号 |
26861436
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研究機関 | 千葉大学 |
研究代表者 |
北橋 正康 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30456040)
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研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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キーワード | WRN / ミュラー細胞 |
研究実績の概要 |
まずWRN遺伝子がglia系細胞であるミュラー細胞で発現するか確認するため、ヒト成人網膜凍結切片でWRN蛋白とミュラー細胞マーカーであるvimentinの二重染色とDAPIによる核染色 を行った。 WRNタンパクは神経節細胞から外顆粒層にかけて発現し、主にミュラー細胞のマーカーであるVimentinと一致したが、アストロサイトのマーカーであるGFAPと一致しなかった。またミュラー細胞内でのWRNタンパクの局在を確認したが、WRN遺伝子はDAPIとは一致せず、WRNタンパクの細胞内局在は核内ではなく細胞質であることが分かった。このことからヒト成人網膜においてWRNタンパクは、ミュラー細胞の細胞質に局在する事がわかった。 今後ミュラー細胞においてWRN遺伝子の役割を解析する手段として、siRNAの手法を用いてWRN遺伝子のノックダウンを行う。当初ヒト由来のミュラー細胞株であるMIOM-1を使用する予定であった。しかしMIOM-1を提供してもらう予定であった研究者からその提供を受けることができなくなったため、げっ歯類のミュラー細胞を使用する予定である。ミュラー細胞のノックダウンについては、ヒトにおいてはWRN遺伝子の単独異常により表現型がみられることが知られている。しかし、マウスやラットといったげっ歯類では、ヒトに比べてpolyAが長鎖であることから、RNAの構造が比較的安定しているため、表現型を確認するためには、テロメアとWRNの両遺伝子をダブルノックダウンする必要がある。現在テロメアとWRN遺伝子のダブルノックダウンを行うべく準備を進めている。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初ヒト由来のミュラー細胞であるMIOM-1を使用する予定であったが、共同研究の了承が得られず、マウス由来のミュラー細胞にて実験系を執り行っている。
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今後の研究の推進方策 |
マウス由来ミュラー細胞に対して、テロメアとWRN遺伝子のダブルノックダウンを行い安定株を得て表現型を解析する。
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次年度使用額が生じた理由 |
研究開始が遅れたため、実験に必要な物品購入をまだ行っていないから。
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次年度使用額の使用計画 |
27年度分に加え、試薬、マウス購入代、実験キット購入代として使用予定である。
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