| 研究課題/領域番号 |
26861487
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
加藤 源俊 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (20573463)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | リンパ管腫 / リンパ管奇形 / 漢方薬 |
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| 研究実績の概要 |
（１）リンパ管腫患者由来リンパ管内皮細胞株（Human lymphangioma-derived lymphatic endothelial cells, HL-LEC）の樹立に関して 昨年度は手術時の切除検体からリンパ管内皮細胞１株を得ることができた。また、HL-LECを効率的に得る方法として、磁気細胞分離装置を用いた細胞の精製を確立した。今後もHL-LECの樹立を継続すると共に、磁気細胞分離装置を用いた細網の精製を行う。
（２）HL-LECにおける異常発現遺伝子の機能解析に関して 遺伝子の性質上疾患との関連が強く疑われる遺伝子に関し、機能解析を行っている。
（３）HL-LECに対する漢方薬の影響の検討 近年、リンパ管腫の患児に対して特定の漢方薬の内服により病変の縮小効果を示した、との報告が増えてきている。これらの漢方薬の作用機序を解明するためにHL-LECに対する漢方薬およびその構成生薬の効果を検討し、これらの漢方薬や構成生薬がHL-LECに対して増殖抑制を生じ、また細胞透過性の亢進を生じることが示唆された。この結果は第５２回日本小児外科学会学術集会、European Pediatric Surgery Association 2015、第１２回日本血管腫血管奇形学会学術集会、第３１回日本小児外科学会 秋季シンポジウムで発表した。 今後、リンパ管腫モデルマウスに対するin vivoでの実験を予定している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
（１）リンパ管腫患者由来リンパ管内皮細胞株（Human lymphangioma-derived lymphatic endothelial cells, HL-LEC）の樹立に関して 昨年度は手術時の切除検体からリンパ管内皮細胞株を得て、HL-LECの樹立を継続している。また、磁気細胞分離装置を用いた細胞の精製の効率化を行うことができた。
（２）HL-LECにおける異常発現遺伝子の機能解析に関して 遺伝子の性質上疾患との関連が強く疑われる遺伝子に関し、機能解析を継続している。
（３）HL-LECに対する漢方薬の影響の検討 近年、リンパ管腫の患児に対して特定の漢方薬の内服により病変の縮小効果を示した、との報告が増えてきている。これらの漢方薬の作用機序を解明するためにHL-LECに対する漢方薬およびその構成生薬の効果を検討し、これらの漢方薬や構成生薬がHL-LECに対して増殖抑制を生じ、また細胞透過性の亢進を生じることが示唆された。この結果は第５２回日本小児外科学会学術集会、European Pediatric Surgery Association 2015、第１２回日本血管腫血管奇形学会学術集会、第３１回日本小児外科学会 秋季シンポジウムで発表した。 今後、リンパ管腫モデルマウスに対するin vivoでの実験を予定している。
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| 今後の研究の推進方策 |
（１）リンパ管腫患者由来リンパ管内皮細胞株（HL-LECs）の収集 新たなHL-LEC 株の樹立は継続して年間1～3 株を目標とする。
（２）異常発現遺伝子の機能解析 上記モデルを用いて、遺伝子導入または抑制による遺伝子の関与を検討する。具体的手法としては、増殖能や遊走能の検討、管状構造形成アッセイ、NOGマウスへの細胞移植によるリンパ管腫様組織の形成実験を予定している。これらにより該当遺伝子の疾患における関与の程度が示される。
（３）リンパ管腫モデルマウスを用いた漢方薬の検討
近年、リンパ管腫の患児に対して特定の漢方薬の内服により病変の縮小効果を示した、との報告が増えてきている。これらの漢方薬の作用機序を解明するためにHL-LECに対する漢方薬およびその構成生薬の効果を検討し、これらの漢方薬や構成生薬がHL-LECに対して増殖抑制を生じ、また細胞透過性の亢進を生じることを示した。別の研究にて作成中のリンパ管腫モデルマウスを用いて、in vivoでの漢方薬の効果を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
物品費に関しては、想定していた実験を翌年度としたため残額が生じた。また予定していた学会参加を保留としたため旅費残額が生じた。その他の費用として英文校正などを次年度に行うこととしたため、残額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
物品費は、必要となる実験試薬の購入に使用する。旅費に関しては、本年の学会参加、研究会参加に使用する予定である。その他の費用に関しては、英文校正、マウス維持費などに使用する予定である。
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