| 研究課題/領域番号 |
26861528
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
田畑 雄一 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (70515238)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | レゾルビン / リボソーム内包化レゾルビン |
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| 研究実績の概要 |
平成26年度は
I. 陰性電荷リポソーム内包化レゾルビン（NCLER）の精製として逆相蒸発法を用いて、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、コレステロールをモル比6:4:1の比率にてジエチルエーテルやクロロホルムに溶解し、封入物質であるレゾルビンを含む水溶液を加えて、ロータリーエバポレータ（既存装置）と超音波乳化装置、ホモジナイザーを用いて減圧下に有機溶媒を除去してエマルジョンとし、0.2ミクロンのメンブランフィルターにてNCLERリポソームを得る。
Ⅱ. マクロファージ細胞の機能に対するレゾルビンの影響を評価する目的で継体培養系マクロファージ様細胞であるJ774A.1細胞を用いて、貪食能、サイトカイン産生能、NO産生能に対するNCLER投与の効果を調べる。J774A.1 細胞をRPMI1640培養液にて継代培養し、細胞数を調整して、一定数（1x10＾6 程度）をプレートに用意する。インターフェロンγでプライミング状態として、大腸菌LPSで刺激を加える。NCLERリポソームを異なる濃度で培養液に加えた場合に各種マクロファージ機能がどう変化するかを定量する（詳細手順は以下①-⑦）。①貪食能への影響②遊走活性への影響③ 殺菌能への影響④ サイトカイン産生への影響⑤ サイトカイン発現への影響⑥ 活性酸素産生への影響⑦ 一酸化窒素産生（NO）への影響。
以上2項目実験を予定していたが進捗は大幅に遅れ現在は上記実験の準備段階にあり、器材等の準備が整い次第開始予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
本研究以外の研究・教育・臨床業務ならびに実験機材の準備遅延のため当初の予定と比較し大幅に研究の進行が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成26年度に施行予定であったI. 陰性電荷リポソーム内包化レゾルビン（NCLER）の精製
逆相蒸発法を用いて、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、コレステロールをモル比6:4:1の比率にてジエチルエーテルやクロロホルムに溶解し、封入物質であるレゾルビンを含む水溶液を加えて、ロータリーエバポレータ（既存装置）と超音波乳化装置、ホモジナイザーを用いて減圧下に有機溶媒を除去してエマルジョンとし、0.2ミクロンのメンブランフィルターにてNCLERリポソームを得る。
Ⅱ. マクロファージ細胞の機能に対するレゾルビンの影響
継体培養系マクロファージ様細胞であるJ774A.1細胞を用いて、貪食能、サイトカイン産生能、NO産生能に対するNCLER投与の効果を調べる。J774A.1 細胞をRPMI1640培養液にて継代培養し、細胞数を調整して、一定数（1x10＾6 程度）をプレートに用意する。インターフェロンγでプライミング状態として、大腸菌LPSで刺激を加える。NCLERリポソームを異なる濃度で培養液に加えた場合に各種マクロファージ機能がどう変化するかを定量する。
以上未達成項目に関しては引き続き平成27年度に施行予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成26年度研究実施の大幅な遅れにより、平成26年予定の研究内容が平成27年度に繰り越されたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
繰り越し金は平成27年度に平成26年度予定の実験を施行予定であり、平成27年度に使用予定である。
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