| 研究実績の概要 |
本研究は，いまだ全貌が明らかとなっていない歯の発生メカニズムを，Hox 遺伝子に着目し，本遺伝子群の歯胚発生への関わりを組織学的，細胞生物学的ならびに形態学的に解明することを目的としている．
胎生 13,14,18 日齢のマウス下顎第一臼歯歯胚において，13のHox 遺伝子が発現しており，その中でも，歯の発生のキーレギュレーターであるShhとの関連が疑われるHoxd12に注目し実験を行った．Hoxd12は四芽由来細胞においてShhの発現を誘導することが報告されており，Shhはそのプロモーター領域にHoxd12結合配列を有しているため，実際にHoxd12が結合することが知られている．
そこで，ラット歯原性上皮細胞を用い，Shhおよびエナメル芽細胞分化マーカーのひとつであるAmbnとの関係を検討するため，Hoxd12遺伝子のsiRNAををエレクトロポレーション法を用いて導入した．導入効率の評価には蛍光ラベルされたコントロールsiRNAを用いた．その後,その遺伝子のノックダウンによる影響を，関連遺伝子の発現により評価，解析を行った．ノックダウン効果の判定には定量性RT-PCR法を用いて行った．
歯原性上皮細胞へHoxd12のsiRNAを遺伝子導入し，Hoxd12，Shh，Ambnの遺伝子発現量を検証した所，それぞれの遺伝子発現量は有意に抑制された．また，上皮細胞をBMP4にて刺激すると，Shh，Ambnの遺伝子発現量が促進し，同時にHoxd12遺伝子の発現も促進した．
以上のことから歯原性上皮細胞におけるHoxd12の発現がShhやAmbnの発現に関連する可能性が示唆された．
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