| 研究実績の概要 |
本研究は，いまだ全貌が明らかとなっていない歯の発生メカニズムを，Hox遺伝子に着目し，本遺伝子群の歯胚発生への関わりを組織学的，細胞生物学的ならびに形態学的に解明することを目的としている．
胎生13,14,18日齢のマウス下顎第一臼歯歯胚において，13のHox遺伝子が発現しており，その中でも，歯の発生のキーレギュレーターであるShhとの関連が疑われるHoxd12に注目し実験を行った．Hoxd12は肢芽由来細胞においてShhの発現を誘導することが報告されており，Shhはそのプロモーター領域にHoxd12結合配列を有しているため，実際にHoxd12が結合することが知られている．
そこで，ラット歯原性上皮細胞を用い，Shhおよびエナメル芽細胞分化マーカーのひとつであるAmbnとの関係を検討するため，始めにHoxd12遺伝子のsiRNAをエレクトロポレーション法を用いて導入した．導入効率の評価には蛍光ラベルされたコントロールsiRNAを用いた．次にHoxd12遺伝子の発現ベクターを作製し，同様にエレクトロポレーション法を用いてラット歯原性上皮細胞に遺伝子導入を行った．コントロール群には，GFP発現ベクターを用いた．
その後，その遺伝子のノックダウンおよび強制発現による影響を，関連遺伝子の発現により評価，解析を行った．
Hoxd12遺伝子の遺伝子抑制モデルおよび強制発現モデルにおいて，Hoxd12遺伝子の発現を抑制すると，AmbnおよびShhの発現が低下し，Hoxd12遺伝子の発現を促進すると両遺伝子の発現は上昇した．
以上のことから歯原性上皮細胞におけるHoxd12 の発現がShh, Ambn の発現に関連する可能性が示唆された．
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