| 研究課題/領域番号 |
26861803
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| 研究機関 | 鶴見大学 |
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研究代表者 |
梅木 大輔 鶴見大学, 歯学部, 助教 (10514937)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 咀嚼筋 / 筋線維タイプ / マイクロRNA |
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| 研究実績の概要 |
歯科矯正治療（咬合の改善）の目的の一つに口腔機能の改善がある。口腔機能の中心的役割を果たす咀嚼筋は四肢の骨格筋と同様に可塑性を有し、その表現型（筋線維サイズ、筋線維タイプ）や生理機能は様々な咬合の状態に適応することが知られている。しかしながら、骨格筋の適応機構の詳細は未だ不明な点が多く、また咀嚼筋でのこの種の研究は非常に少ない。これまで実験動物にラットを用いて咀嚼筋の適応現象を解析し、咬合状態の変化が咀嚼筋の表現型および生理機能に影響を及ぼす事を観察した。本研究では実験動物にマウスを用いて咬合挙上モデルを作製する(mRNAおよびmiRNAの発現解析、機能解析を行うため、遺伝情報の豊富なマウスを実験動物に用いる)。
平成26年度はマウスの咬合挙上モデル作製を目標に実験を行ってきた。我々の作製したラットの咬合挙上モデルと同様に、下顎切歯に咬合挙上板を装着したマウスの咬合挙上モデルを作製し、予備実験にて咀嚼筋の適応現象が誘発されるモデルであることを確認する予定であった。ラットで用いた咬合挙上板をマウス用に改良し、挙上は切歯で2㎜程、2週間の飼育にも耐えうることを確認できた。エサ、水の摂取量ともに問題がないことも確認できた。その後、本実験を行いコントロール群と咬合挙上群の2群での飼育を行った。3，5，7，14日後にそれぞれ屠殺し咬筋、前脛骨筋、ヒラメ筋の摘出を行った。咬合挙上群ではっ咬筋筋重量の増加が認められた。
平成27年度は前年度の結果をふまえ、適応現象を誘発する分子機構を解明するため、可能性のあるシグナル伝達経路に関与する因子の発現量およびリン酸化レベルをWestern blotting法にて定量的に解析。また、咬合拳上により活性化されるシグナル伝達経路に対するデキサメサゾンの拮抗作用について解析を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
平成26年度はまずラットで用いた装置をマウスに応用し、下顎切歯に咬合挙上装置を装着するタイプのマウスの咬合モデル動物を作製した。この際予備実験にて咀嚼筋の適応現象が誘発されるモデルであることを確認することにした。しかし、2週間の飼育中に装置の破損や脱落が続いたこと、適切な咬合挙上量をどれぐらいに設定するかに時間がかかってしまった。そのため咬合挙上群で咬筋筋重量の増加が認められたところまで研究が進んでいる段階であった。
平成27年度は前年度の結果をふまえ、適応現象を誘発する分子機構を解明するため、咬合挙上に拮抗作用があると思われるデキサメサゾンを投与し、シグナル伝達経路に関与する因子の発現量およびリン酸化レベルを解析するため5,14日後にそれぞれ屠殺し咬筋、前脛骨筋、ヒラメ筋、心筋の摘出を行い比較検討を行った。
やや遅れている理由としては平成26年度の段階で装置の製作に時間がかかってしまった事が影響している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、咬合挙上がマウスの咬筋に与える影響を、
1．(1)表現型(筋線維サイズ、筋線維数、筋線維タイプなど、(2)生理機能(筋活動量、発生張力、ATPase活性など)の両面から定量的に解析し、咬合挙上に対する咬筋の適応現象の詳細を明らかにする。
2．咬筋の適応機構を分子レベルで解析する。具体的には、咬合挙上により(1)発現が誘発されるmiRNAの解析(マイクロアレイおよびリアルタイムPCRを用いる)、(2)活性化されるシグナル伝達経路の解析をwestern blotting法にて解析する。
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