| 研究課題/領域番号 |
26870214
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| 研究機関 | 富山大学 |
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研究代表者 |
三原 弘 富山大学, 大学院医学薬学研究部 (医学), 助教 (00612623)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 胃 / 結腸 / 伸展 / ATP / TRPV4 / 上皮細胞 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、１）胃及び結腸上皮細胞に、TRPV4イオンチャネル及びアデノシン三リン酸（ATP）を濾胞内に取り込む小胞型ヌクレオチド輸送体（VNUT）が発現し、２）伸展刺激によりTRPV4の活性化を介して、VNUTによって濾胞内に取り込まれていたATPがエキソサイトーシスによって放出されることを明らかにすることを目的とし、当初は、細胞株で単層を形成させ、TRPV4活性化剤および伸展刺激によってATPが放出され、各種阻害剤で阻害されることを確認する予定であったが、平成27年度は以下の結果を得た。
１）ヒト由来の正常胃上皮細胞株を探索したところ、GES-1細胞株が有望であったため、所有者とMTAを交わし取得した。
２）機能解析としては、細胞株を用いたCaイメージング及び電気生理的解析の一部を行うことができた。
３）ATP放出実験は、平成26年度に前倒しし一部実施済であり、細胞株に伸展刺激を加えた際のATP放出の阻害実験を行った。siRNA導入は難航したため、実験継続となった。
４）VNUT欠損マウスを作出した研究グループとMTAを交わし、消化管組織を取得しタンパクの発現を検討した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初本年度に予定した、ATP放出実験の一部は、前年度に行うことができ、有望な細胞株の取得、VNUT欠損マウスの組織の取得を行えたが、siRNAによるノックダウン実験が難航したため、おおむね順調に進展したと判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
１）ヒト胃上皮細胞株（GES-1）を用いた、TRPV4発現・機能、発現変化の検討
２）機能性消化管障害などの患者から得た標本を用いた検討
３）VNUT欠損マウスもしくは、ATP受容体欠損マウスでの検討
４）siRNAによるノックダウン実験の継続
以上が順調に進めば、胃及び結腸上皮細胞が伸展刺激を受容し、ATPを放出する機構、更には、機能性疾患との関連の一部を明らかにすることが可能となる。
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