| 研究課題/領域番号 |
26870873
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| 研究機関 | 国立感染症研究所 |
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研究代表者 |
石原 朋子 国立感染症研究所, 細菌第一部, 主任研究官 (30450555)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 食中毒 / 病原細菌 |
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| 研究実績の概要 |
現在、原因不明として報告される食中毒の推定原因細菌については、既知の病原因子が検出されない、または検出された細菌による症状が当該食中毒症状と異なる等の理由から病原細菌と特定することが困難となっている。一部の原因不明食中毒については、既知の病原体については未検出であったが、メタゲノム解析により原因細菌が推測されている。前年度においては、分離同定法により食中毒事例の原因細菌として推定された大腸菌ならびにメタゲノム解析により食中毒事例の原因細菌として推定し分離された大腸菌について細胞毒性および細胞付着・侵入性を評価した。また、分離同定法で推定された大腸菌についてゲノム情報を取得し、ORF予測およびBLAST解析を実施した。
本年度においては、取得した2種類の大腸菌ゲノム情報を用いて比較解析等を行った。これらのゲノム情報について、既知の病原性大腸菌（EHEC、EPEC、EAEC、UPEC、ExPEC）のゲノム情報と共にSNP解析を行い、得られたSNPs情報を元にUPGMA法によるクラスター解析を行った結果、これらの大腸菌は2つの大きなクラスターに分けられ、本研究における新規の推定病原細菌は同一クラスターに属した。新規の推定病原細菌はEPEC、UPEC、ExPEC等が多く存在するクラスターに属し、ほとんどのEHECおよびEAECが存在するクラスターとは異なることが明らかとなった。
新規病原細菌の比較解析を行うにあたり、新たな候補株を選定した。分離同定法により原因細菌が推定された食中毒事例のうち、既知の病原因子を保有しない大腸菌が検出された事例において、各事例で検出された菌株間の分子疫学解析を実施するとともに、遺伝子型ならびに血清型を決定し、候補株を選定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ヒト由来の培養上皮細胞に対する当該細菌の細胞付着性が認められており、これは当該細菌による初期の感染様式を明らかにする上で重要な知見となる。現在のところ、既知の病原性大腸菌で確認されるような特徴的な付着様式（localized adhesion、localized adhesion、microcolony formation）は認められないが、特徴的な付着様式を呈する条件を検討する余地がある。また、細胞毒性の評価に関しては、現在の実験系および条件では評価できないため検討が必要である。新たに原因不明食中毒事例2事例における推定原因細菌の解析を本研究に加えた。新たに加えた推定原因細菌もこれまでの解析株と同様に大腸菌株であることから、比較解析等の実施が容易であると考えられる。
上記の現状を考え合わせて、本研究はおおむね順調に進展していると判断できる。
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| 今後の研究の推進方策 |
新たに解析対象に加えた大腸菌株についてゲノム情報の取得を実施する。得られたゲノム情報については、既知の病原性大腸菌およびすでに解析を実施した推定病原大腸菌との近縁関係を明らかにするため、これら菌株のゲノム情報と共にSNP解析を行い、得られたSNPs情報を元にUPGMA法によるクラスター解析を実施する。また、ORF予測およびBLAST解析を実施し、新規の推定病原大腸菌間の比較解析を行うことを予定している。
新たな解析対象株について、ヒト由来の培養上皮細胞を用いた感染実験を行うことを予定する。感染実験により、腸管上皮細胞に対する病原性を評価するとともに、細胞付着・侵入等in vitroにおける感染様式を調べることを目的とする。
当該細菌を含む原因不明食中毒の推定原因細菌について、病原性の評価を行うことによって新規の病原細菌として位置づけ、病原因子の同定・解析、新規病原細菌感染メカニズムの解明および検査法・予防対策の確立を目指す。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成27年度実施予定の実験項目が予定よりも変更せざるを得なかったので、平成28年度に繰越す状況となったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度以降、今後の研究の推進方策に従い引き続き適切に予算を執行していく予定である。
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