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副腎皮質は球状層、束状層、網状層から構成され、特に球状層では鉱質コルチコイドであるアルドステロンの合成酵素CYP11B2が特異的に発現している事が知られていた。これまでの副腎研究は腫瘍化した培養細胞を用いたものが主で、その原因は組織の複雑さにより球状層細胞を単離する事が困難であるためであると考えられる。そこで本研究ではマウス副腎球状層細胞の単離法を確立し、CYP11B2遺伝子発現機構を解明することを目的とした。
本研究において、申請者はヒトCYP11B2遺伝子座に緑色蛍光タンパク質(GFP)を組み込んだバクテリア人工染色体を用いてトランスジェニック(Tg)マウスの作製を試みた。得られたマウスの各組織におけるGFP mRNAの発現を検証したところ、内在性CYP11B2と同様に、副腎における特異的な発現が観察できた。これらの結果は、今回の解析に用いたバクテリア人工染色体に含まれるCYP11B2遺伝子の周辺領域が副腎における発現特異性を十分に生じさせることを示しており、CYP11B2遺伝子の組織特異的な遺伝子発現制御機構解明の端緒になり得ると考えられる。
また、培養細胞を用いたStable Isotope Labeling using Amino acids in cell Culture (SILAC)法によるAngII応答遺伝子の探索を行い、AngII刺激により発現が上昇する核内因子の網羅的探索を前年度に引き続き行った。その結果、転写因子MEIS1をはじめとしていくつか副腎特異的に発現する因子を同定した。
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