| 研究課題/領域番号 |
26893263
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
石川 景一 順天堂大学, 医学部, 助教 (90733973)
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| 研究期間 (年度) |
2014-08-29 – 2016-03-31
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| キーワード | パーキンソン病 / iPS細胞 / オートファジー |
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| 研究実績の概要 |
樹立したPARK9患者由来iPS細胞を用いて、神経細胞に分化させ、ウエスタンブロットを中心に、疾患iPS細胞由来神経細胞のオートファジー機能をオートファジー阻害剤等を用いながら検討を行った。同手法により疾患iPS細胞由来神経細胞においてもオートファジータンパク質等の評価が可能であることを確認したが、オートファゴソームマーカーであるLC3-IIをはじめとする蛋白発現量に、疾患ラインと正常対照ラインでの明らかな差は認められなかった。
そこで、パーキンソン病はドパミン神経障害を特徴とすることから、計画通りに進まないときの対応として予定していた通り、iPS細胞をドパミン神経に分化させて検討を行うこととした。iPS細胞からドパミン神経細胞への誘導効率は、報告されている方法では非常に低いことから、小分子化合物の投与を検討することにより、ドパミン神経細胞の誘導効率を改善することに成功した。さらに、ドパミン神経細胞に誘導後の表現型が現れる期間を検討することにより、疾患iPS細胞をドパミン神経細胞に誘導後に異常が現れ始める期間を現在見いだしつつある。26年度の上記検討をもとに、27年度ではドパミン神経細胞に誘導した神経細胞にて、適切な分化時期にどのような異常が起こるかを検出する予定である。
同時に、GFPで標識したオートファゴソームマーカーLC3を発現するレンチウイルスベクターの作製も行った。分化させた神経細胞での発現を確認しており、今後適切なMOIを決定し、免疫組織学的あるいはライブイメージングも用いたオートファジー解析も追加する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
iPS細胞由来神経細胞におけるウエスタンブロット等を用いたオートファジーの評価方法については施行できておりほぼ予定通り確立できている。
引き続きゲノム編集後のiPS細胞や、他の疾患ラインを用いた比較を27年度に行う。
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| 今後の研究の推進方策 |
PARK9患者由来iPS細胞を用いて、ドパミン神経特異的に分化させたオートファジーの機能評価を引き続き行う。さらに27年度に予定していた通り、他の遺伝性パーキンソン病由来iPS細胞を同様にドパミン神経細胞に誘導し、オートファジーさらには神経細胞脆弱性に付いての検討を加える。
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