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けいれん発現および抗てんかん薬作用とイノシチドレスポンスとの関連性を追究しつつある。
われわれはラット脳の膜画分に、代表的抗てんかん薬の一つであるフェニトイン(PHT)の特異的結合部位を見出し、薬物の化学構造により結合選択性を示すことを見出した。またPHT以外の抗てんかん薬、神経伝達物質は結合親和性をほとんど示さないことを認めた。
この膜画分に存在するPHT結合部位に対する脂質の影響を検討するため脳の各種脂質を分離した。従来ポリホスホイノシチド(PPI)の有効な分離法がなかったため、その精製法に留意した。まず本研究費により購入された固定型マイクロ波照射装置を用い、ラット脳の分解酵素を阻止した後、CM-セルロースおよびTMS-シリカなどのクロマトグラフィーを用い、トリホスホイノシチド(TPI)およびジホスホイノシチド(DPI)の分離、定量法を確立した。この方法を用いることにより、TPIは従来報告された値の約2倍量にあたる800nmol/g湿重量が脳に存在することを認めた。この方法を応用し、ラット脳の各脂質を分離し、PHT特異的結合部位に対する影響を検討し、PPI(TPIおよびDPI)のみがPHT結合部位との結合親和性を示すことを認めた。
つぎに〔【^3H】〕-イノシトールを用いたイノシトールレスポンスに対するけいれん関連 物質の影響を検討した。ムスカリン性アンタゴニストであるカルバコール、ノルエピネフリン、高濃度カリウムなどはレスポンスを著明に増強させることを認めた。一方けいれん惹起物質であるペンチレンテトラゾールはレスポンスを増強させなかった。このレスポンスによりTPIから水解されるセカンドメッセンジャー的作用をもっと提唱されるイノシトール三リン酸と細胞内カルシウムについて検討を行なう予定で、大量のTPIを分離する方法についても現在検討中である。焙
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