遺伝性蓄積性疾患の遺伝子組換えによる治療法の基礎的研究

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 61440044
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 折居 忠夫 岐阜大学, 医学部, 教授 (20045339)
• 研究分担者: 祐川 和子 岐阜大学, 医学部, 助手 (60115409) ; 鈴木 康之 岐阜大学, 医学部附属病院, 講師 (00163014)
• キーワード: ムコ多糖症 / βーグルクロニダ-ゼ欠損症 / Morquio症候群 / 遺伝子解析 / cDNAクロ-ニング

研究概要

1.βーグルクロニダ-ゼ欠損症の遺伝子解析
昨年はβーグルクロニダ-ゼ欠損症の本邦1例について、cDNAをクロ-ニングし、本症では世界ではじめて病因となる遺伝子変異部位を同定した。本年はさらに本邦2例について、PCR(palymerase chain reaction)法を用いて全長cDNAをクロ-ニングし、塩基配列を決定した。1例は昨年の症例と同じAla^<619>(GCG)→Val(GTG)変換であり、もう1例はArg^<382>(CGT)→Cys(TGT)と変換される一塩基置換であった。各々の変異部位を含むcDNAを発現ベクタ-PSVLに組み込み、COS細胞にトランスフェクションしてβーグルクロニダ-ゼ活性を測定したところ、活性は検出されなかった。又患者の家系内診断もPCR法を利用して行ない、両親が各々の変異のヘテロであることも確認した。今後この成果をもとにして、βーグロクロニダ-ゼ欠損症の酵素発現異常のメカニズムをさらに検討する予定である。
2.Hunter症候群、Sanfilippo症候群、Morquio症候群の病因解析
Morquio症候群の欠損酵素であるガラクトサミンー6Sーサルファタ-ゼを単離精製し、一部のアミノ酸配列を決定した。これにもとづき塩基配列を推定し、プロ-ブを準備して遺伝子クロ-ニングを開始しつつある。Sanfilippo,Hunter症候群の欠損酵素については、モノクロ-ナル抗体を調製しつつある。酵素精製が当初の計画より時間を要したが、ようやく成果を治めつつある。

研究成果

• [文献書誌] T.Fukao,K.Kamijo,T.Osumi,Y.Fujiki,S.Yamaguchi,T.Orii and T.Hashimoto: "Molecular clon ing and nucleotide sequence of cDNA encoding the entire precursor of rat mitochondrial acetoacetylーCoA thiolase." J.Biochem.106. 197-204 (1989)
• [文献書誌] H.Nagasawa,S.Tamaguchi,T.Orii,R.B.H.Schutegns,L.Sweetman and T.Hashimoto: "Heterogeity of defects in mitochondrial acetoacetylーCoA thioiase biosynthesis in fibroblasts from four patients with 3ーketothiolase deficiency." Pediatr.Res.26. 145-149 (1989)
• [文献書誌] Y.Suzuki,N.Shimozawa,T.Orii and T.Hashimoto: "Major peroxisomal membrane polypeptides are synthesized in cultured skin fibroblasts from patients with Zellweger syndrome." Pediatr.Res.26. 150-153 (1989)
• [文献書誌] M.Masuno,T.Orii,K.Sukegawa and T.Taga: "Restriction fragment length polymorphism analysis in healthy Japanese individuals and Japanese families with Gaucher disease." Acta.Paediatr.Jpn.31. 158-162 (1989)
• [文献書誌] M.Masuno,S.Tomatsu,K.Sukegawa and T.Orii: "Nonーexistence of a tight association between a ^<444>leucine to proline mutation and phenotypes of Gaucher disease:high frequency of a NciI polymorphism in the nonーneuronopathic form." Hum.Genet.84(2). 203-206 (1990)
• [文献書誌] S.Tomatsu,K.Sukegawa,Y.Ikedo,S.Fukuda,Y.Yamada,T.Sasaki,H.Okamoto,T.Kuwahara and T.Orii: "Molecular basis of mucopolysaccharidosis type VII:substitution of valine for alanine 619 in βーglucuronidase." Gene.