ヒト脳よりのプロスタグランジンE合成酵素の精製とそれに対する抗体の作製

1986 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 61570138
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 成宮 周 京大, 医学部, 助手 (70144350)
• キーワード: プロスタグラジンE合成酵素 / グルタチオントランスフェラーゼ / ヒト脳 / 神経細胞 / アストログリア細胞 / 抗酵素抗体 / 免疫組織化学

研究概要

ヒト脳可溶性画分よりプロスタグラジンE(PGE)合成酵素を精製し、これに対する抗体を作製した。この抗体を用いてPGE合成酵素のサビユニット機構を解析し、ヒト脳切片でPGE合成酵素の免疫組織化学を行った。以下各々について詳述する。
1.前年度の研究で確立した方法に従い、ヒト脳可溶性画分より2種類のPGE合成酵素(以下ピーク1及びピーク2酵素と称す)を精製し、それぞれを抗原としてウサギを免疫した。3〜4回のブースター注射ののち、各々の酵素に対する抗血精を得た。
2.得られた抗ピーク1及び抗ピーク2のポリクローナル抗体を用い、ピーク1及びピーク2酵素の異同及び各々のサブユニット構造を解析した。この2つの酵素はいづれも2量体であり、ピーク1は24.5Kと25Kの2つのサブユニット、ピーク2は25Kの見かけ上単一のサブユニットの2量体である。また、両酵素はPGE合成酵素活性のほかにグルタチオントランスフェラーゼ活性をもつなどの共通性がある。上記抗体を用いたイムノタイトレーションでは、抗体過剰域で抗ピーク1抗体はピーク1及びピーク2酵素に同程度結合した。しかし、抗ピーク2抗体は、ピーク1にはピーク2の半量しか結合しなかった。この結果は、ピーク1と2の25Kサブユニットが共通の抗原性をもつこと、ピーク1の他の24.5Kサブユニットはこれとは異なることを示唆するものと考えられる。
3.上記の2つの抗体を用いて、手術時に得たヒト大脳皮質切片において免疫組織化学を行った。その結果、抗ピーク1抗体によって神経細胞が強陽性となった。また、アストログリア細胞にも陽性所見がみられた。一方、抗ピーク2抗体によっては、神経細胞にのみ陽性所見がみられた。

研究成果

• [文献書誌] Ogorochi,T.;Ujihara,M.;Narumiya,S.: Journal of Neurochemistry. 48. 900-909 (1987)
• [文献書誌] Narumiya,S.;Fukushima,M.: Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutice. 239. 500-505 (1986)
• [文献書誌] Narumiya,S.;Ohno,K.;Fujiwara,M.;Fukushima,M.: Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 239. 506-511 (1986)
• [文献書誌] Narumiya,S.;Okuma,M.;Ushikubi,F.: British Journal of Pharmacology. 88. 323-331 (1986)
• [文献書誌] Kita,T,;Yokode,M.;Watanabe,Y.;Narumiya,S.;Kawai,C.: Journal of Clinical Investigation. 77. 1460-1465 (1986)
• [文献書誌] Ohashi,Y.;Narumiya,S.: Journal of Biological Chemistry. 262. 1430-1433 (1987)
• [文献書誌] Narumiya,S.;Ohno,K.;Fukushima,M.;Fujiwara,M.(ed.by Santoro,G.M.,et al.): "Cellular uptake and nuclear accumulation of prostaglandin A and J,a mechanism of prostaglandin-induced growth inhibition in Prostaglandins in Cancer Research" Springer Verlag,Heidelberg,West Germany, (1987)