モノクローナル抗体を用いての血小板膜糖蛋白の電顕的解析

1986 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 61570597
• 研究機関: (財)東京都臨床医学総合研究所
• 研究代表者: 山崎 博男 臨床医総研, その他, その他 (50013826)
• 研究分担者: 山本 正雅 東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部, 研究員 (50150884) ; 田上 憲次郎 東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部, 研究室長 (30014137)
• キーワード: 血小板膜糖蛋白 / 免疫電顕 / 血小板受容体 / リストセチン凝集 / トロンビン凝集 / 血小板無力症 / モノクロナール抗体 / 受容体刺激

研究概要

血小板表面に存在する膜糖蛋白(Glycoprotein,GP)は種々の刺激に対する血小板の受容体として考えられている。中でもGPIbにはリストセチン存在下でのvon Willebrand因子(vWF)およびトロンビンの受容体があり、GP【II】b/【III】aにはフイブリノゲンの結合部位があるとされる。最近結合特異性のあるモノクロナール抗体を利用することにより、血小板膜構成成分の形態的観察の可能性が期待されており、当研究室でも上記GPに対するモノクロナール抗体をマウスを用いて作成したので、これを用い免疫電顕法によりGP【I】b、【II】b/【III】aの分布様式と、血小板刺激による変化を観察し、その意義を検討した。
洗浄健康人血小板浮遊液を用い、グルタールアルデヒド前固定後、各GPに対するモノクロナール坑体30μg/mlを加え37℃、30分間孵置後、ビオチン-抗マウスIgG、ついでアビジン-フエリチンを加え、室温にて各2時間孵置、水洗後オスミウム酸後固定し検体を得た。また前固定せずに同様処理を行ったもの、さらにリストセチンとVWF、またはトロンビンを加えた標本についても観察した。その結果GP【I】b、【II】b/【III】の分布を透過電顕下にフエリチン粒子の接着像としてとらえた。GP【I】bは間隔100nm前後、【II】b/【III】aはこれよりやや広い間隔でほぼ均等に分布していた。走査電顕下、表面が金属粒子で被覆されること、走査電顕解像力からフエリチン粒子塊は大きくみえるが、その中心間距離は透過電顕像の場合とほぼ同様であった。GP【I】bの数は血小板あたり約8000個で、従来いわれているvWF結合数の4分の1が形態的に認識可能であった。【II】b/【III】aはこれよりやや少なく、また血小板無力症血小板では認められなかった。GP【I】b分布はvWF、トロンビン刺激によりクラスター化し、受容体機能を示唆する形態的変化が生じることが推察された。

研究成果

• [文献書誌] Yamamoto N;Kitagawa H;Tanoue K;Yamazaki H: Thrombosis Research. 39. 751-759 (1985)
• [文献書誌] 山崎博男,田上憲次郎,山本正雅,山本一夫,鈴木英紀,北川恒代: 臨床薬理の進歩'85. 25-48 (1985)
• [文献書誌] Yamamoto K;Yamamoto N;Kitagawa H;Tanoue K;Kosaki G;Yamazaki H: Thrombosis and Haemostasis. 55. 162-167 (1986)
• [文献書誌] Yamamoto K;Kosaki G;Suzuki K;TaNoue K;Yamazaki H: Thrombosis Research. 43. 41-55 (1986)
• [文献書誌] 山崎博男: 日本内科学会雑誌. 75. 24-28 (1986)
• [文献書誌] Suzuki H;Yamamoto N;Tanoue K;Yamazaki H: Histochemical Journal.
• [文献書誌] Yamazaki H;Mustard JF: "Platelet Activation" Academic Press, 210 (1987)
• [文献書誌] 山崎博男,青木延雄,大熊稔,蔵本淳,日高弘義: "血小板1986-血小板の細胞骨格と膜糖蛋白-" 科学評論社, 205 (1986)