| 研究概要 |
蓚酸カルシウム(CaOx)結石患者と正常者の24時間蓄尿に硫安を加えて80%飽和とし、得られた沈澱をEDTAで透析して硫安を除き、更にSephader G-25で脱塩をし高分子分画を抽出した。透析尿の有する抑制活性の90%以上がこの高分子分画に回収された。次にDEAE-Cellulose column Chromatoyraphyを用い、Kcl濃度のgradientを用いて高分子分画を分離し、各FraitionのCaox結晶成長抑制活性を測定した結果、4つの抑制活性Peakが認められた。これら4つのPeak分画を更に詳細に、sephacles G-75でのゲル濾過と蛋白用高速液体クロマトグラフィで検討した結果、それぞれのPeak分画を形成する物質はほぼ1種類である事が判明した。即ち分子量が6000,35000,44000,76000の4つの物質が主要な尿中高分子抑制物質である事が明らかとなった。分子量6000の物質は糖であることが判明し、残りの3つは蛋白である事が分かった。4つのうち、抑制活性の高い3つ(分子量6000,44000,76000)については精製することができた。臨床的意義を知れため、結石患者群と正常者群の高分子分画をDEECetlulose columu chismatogrouphyで分離し、4つのPeak分画の抑制活性を比較検討した。分子量6000,35000,44000の分画では両群間に差を認めなかったが、分子量76000の分画では結石患者群で有意な低下が認められた。この分子量76000の蛋白は4つの抑制物質中、最っとも抑制活性が高く、しかも結合患者群では抑制活性が低下していることより、結石発生に重要な意味を持つことが明らかとなった。更にこの蛋白はCPCで沈澱すすることより、従来はglycosamipoylycanの一種として考えられてきた可能性が強い。しかしウロン酸を含まないことPristeinaceで活性を失うことより特殊な糖蛋白であることは間違いない。現在この蛋白のモノクロナール抗体を作製中であり、また糖製された3つの抑制物質の糖、アミノ酸組式を分析中である。
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