| 研究概要 |
象牙芽細胞の分化を研究する上において, 象牙芽細胞分化のマーカーが重要となる. 象牙芽細胞は高度に機能分化しているため, 象牙芽細胞に特有な細胞膜あるいは細胞質成分が存在すると考えられる. そこでラット象牙芽細胞に対するモノクローナル抗体の作製を試みた.
ラット切歯より集めた象牙芽細胞をBACB/Cマウスに2回腹腔内注射し, その3日後に通法に従い脾細胞とmyeloma株細胞を細胞融合した. 歯髄組織の凍結切片を融合細胞(hybridoma)の培地を用いて間接蛍光抗体法をおこない, 象牙芽細胞に対する抗体を産生するhybridomaをscreeningし, 限界希釈法によりクローニングを行ない, ラット象牙芽細胞を特異的に認識するモノクローナル抗体を得た. この抗体は切歯だけでなく, 臼歯の象牙芽細胞にも同様に結合した. しかし分化したばかりの幼若な象牙芽細胞(pre-odontoblast)には結合せず, 添加性の石灰化を開始しはじめた象牙芽細胞(young odontoblast)及び, それ以降のstageの象牙芽細胞に結合した. 象牙芽細胞を遠心操作, tritonX処理により各分画に分け, ELISA法をおこなったところ, この抗体は膜分画に結合した. また免疫組織学的所見と合わせると, この抗体は象牙芽細胞の象牙質に接する遠心細胞膜に結合することが推定された. なお, Inomunolilottingの結果より, この抗体の認識する抗原物質の分子量は約38Kと推定された.
我々は以前よりラットにコルヒチンを大量投与すると, 既存の象牙芽細胞は壊死に陥り, 新たに歯髄の未分化間葉細胞より象牙芽細胞株細胞が分化する現象を報告してきた. この分化の過程において, 充分に機能分化した象牙芽細胞様細胞にのみ, 象牙芽細胞に対するモノクローナル抗体が結合した.
本研究において我々が作製したラット象牙芽細胞に対するモノクローナル抗体は, 象牙芽細胞の分化を研究する上で有用な手段となるものと考えられる.
|
