| 研究概要 |
抗イノシトール1,4,5ートリスホスフェイト抗体及び抗フォスファチジルイノシトール4,5ービスホスフェイト抗体の性質を調べた。抗IP_3抗体は1gMで抗PIP_2抗体は1gG2bであった。特異性は抗IP_3抗体が1,3,4ーIP_3、1,3,4,5ーIP_4よりも1,4,5ーIP_3に対して10倍程度affinityが高かったが、未だ十分の特異性とは言えなかった。一方抗PIP_2抗体はPIP_2に対して非常に特異性が高く、十分使用できると考えられた。本PIP_2抗体を使ってPIP_2アッセイ法を確立した。細胞(1×10^6)よりPIP_2を抽出し、TLC上にスポットした後展開する。このTLCプレートを用いて抗PIP_2抗体によるTLCイムノスティニングを行った。発色後、TLCスキャナーによりその濃度を読み取り、標準曲線よりPIP_2を定量した。本定量法により20pmolから1nmolの微量でPIP_2が定量できるようになった。本法は従来の無機リン定量法に比べ約1000倍感度が良い微量定量法である。
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