| 研究課題/領域番号 |
62440019
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
佐藤 文昭 北海道大学, 獣医学部, 教授 (10162471)
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| 研究分担者 |
遠藤 大二 北海道大学, 獣医学部, 助手 (40168828)
林 正信 北海道大学, 獣医学部, 助教授 (10130337)
喜田 宏 北海道大学, 獣医学部, 助教授 (10109506)
桑原 幹典 北海道大学, 獣医学部, 助教授 (10002081)
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| キーワード | リコンビナントウイルス / 鶏痘ウイルス / 七面鳥ヘルペスウイルス / チミジンキナーゼ / ニューカッスル病ウイルス / ヘマグルチニンノイラミニダーゼ |
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| 研究概要 |
1.鶏痘ウイルス(FPV)H株の組み換え体作出のため、同ウイルスのチミジンキナーゼ(TK)遺伝子をクローニングした。クローニングされた遺伝子がTK遺伝子であることは、オリゴヌクレオチドをプローブとしたサザンプロットハイブリダイゼーション及び制限酵素切断パターンから確認された。クローニングされたTK遺伝子内にワクシニアウイルス由来のプロモーターであるP7.5を挿入し、その下流に外来遺伝子クローニングサイトを構築した。一方、P7.5及びニューカッスル病ウイルス(NDV)ヘマグルチニンノイラミニダーゼ(HN)遺伝子の連結されたクローンを入手し、このHN-P7.5のDNAフラグメントをTK遺伝子内に挿入したクローンを作出した。現在このクローンを用いNDVHNを発現するFPV組み換え体を作出している。
2.七面鳥ヘルペスウイルス(HVT)のTK遺伝子の所在を知るため、HVT全遺伝子をBamHI、PstI,及びHindIIIにより切断し、TK^-細胞にトランスフェクトしたが、TK^+に形質転換される細胞は認められなかった。現在HVTのTK^-変異体を作出中である。
3.ウズラ由来株化細胞であるQT-35からTK^-変異細胞を確立し、その性状を検討した。確立された変異細胞は、チミジンの取り込み、TK活性の測定及び酵素抗体染色によりTK^-細胞であることが確認された。また、この細胞は、親株と同じカリオタイプをもち、そのTK^+への復帰率は、1.0×10^<-5>以下であった。更に、この細胞は、HVT及びFPVに感受性で明瞭なプラークを形成した。
4.NDVHNを発現するカイコ多核体ウイルスの作出を試み、螢光抗体法で陽性のクローンを2クローン得た。現在更に詳しく解析中である。
5.NDVHNを発現するワクシニアウイルスLC株の組み換え体を作出した。
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