| 研究課題/領域番号 |
62440031
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| 研究種目 |
一般研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
細菌学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
竹田 美文 東京大学, 医科学研究所, 教授 (30029772)
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| 研究分担者 |
倉園 久生 東京大学, 医科学研究所, 助手 (90186487)
湯通堂 隆 東京大学, 医科学研究所, 助手 (80182674)
平山 寿哉 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (50050696)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| キーワード | Vero毒素 / VT1 / VT2 / VT2vh / クローニング / RNAーNーglycosidase / ricin / 腸管出血性大腸菌 |
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| 研究概要 |
エンテロトキシン(下痢原因毒素)の構造と機能を明らかにする目的で研究を行い、以下の成績を得た。
1.腸管出血性大腸菌の産生する3種類のVero毒素(VT1、VT2およびVT2vh)を精製し、その物理化学的性状を明らかにした。
2.VT1、VT2、VT2vhの構造遺伝子をクローニングし、VT1,VT2、VT2vhをコードする遺伝子のヌクレオタイド配列を明らかにした。
3.VT1がShigella dysenteriaeが産生する志賀毒素と全く同一であることを明らかにした。一方VT2の分子構造はVT2vhとよく似ており、アミノ酸配列で比較した場合、VT2、VT2vhはVT1と約60%の相同性があることがわかった。
4.VT1、VT2、VT2vhの作用機作を調べた結果、志賀毒素の作用機序と同じく、RNA N-glycosidase活性を有し、その結果、真核細胞の60Sリボソーム亜粒子中の28S RNAの4324番目のアデニンを遊離さすことを明らかにした。この作用は植物毒素であるRicinの作用と全く同一であることがわかった。
5.VT1、VT2、VT2vhおよびRicinの一次構造を比較し、4種類の毒素に共通の構造部分を同定し、その部分がRNA Nーglycosidase活性の活性中心構造であると推定した。site-directed mutagenesisの手法により、この部分のアミノ酸の異なる変異毒素産生菌を作成し、活性に関与するアミノ酸を決定した。
6.毒素原性大腸菌が産生する耐熱性エンテロトキシン(ST)の3対のジスルフィド結合の位置を決定し、それらが活性の発現に重要であることを示した。
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