| 研究課題/領域番号 |
62440087
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| 研究機関 | 藤田学園保健衛生大学 |
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研究代表者 |
千谷 晃一 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 教授 (60179942)
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| 研究分担者 |
藤村 吉博 奈良県立医科大学, 輸血部, 助教授 (80118033)
松井 太衛 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助手 (90183946)
小山 文隆 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助手 (40194641)
関口 清俊 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 講師 (50187845)
水落 次男 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助教授 (90133149)
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| キーワード | フォルビルブラント因子 / 血小板凝集 / 血小板膜糖タンパク質(GP)Ib / リストセチン / ボトロセチン / アミノ酸配列 / ジスルヒド結合 / アスパラギン結合糖鎖 / モノクロナール抗体 / エピトープ |
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| 研究概要 |
1) ボトロセチンの精製と性質:リストセチン同様フォンビルブラント因子(vWF)による血小板凝集を惹起するタンパク質性因子として知られる蛇(Brthrops jararaca)毒中のボトロセチンを数種の液体クロマトグラフィーを用いてほぼ純粋な状態にまで精製した。精製標品は単一のアミノ末端アミノ酸配列を示し、SDSーPAGEで非還元で28kDa、還元で31kDaとほぼ同一の分子量を示すことからモノメリックな1本のポリペプチド鎖から構成されていることがわかった。又等電点pH4以下の異常に酸性の強いタンパク質で、ジスルヒド結合を多く含み、それを切断しない状態ではトリプシン、キモトリプシン、V8プロテアーゼなどに対し著るしい抵抗性を示す。現在その作用機作について検討中である。
2) 抗vWFモノクロナール抗体NMCー4のエピトープ解析:vWFと血小板膜GPIbとの結合様式を解析するため、リストセチン血小板凝集を抑制するNMCー4の固相化カラムを作成し、vWFのトリプシン消化物を抗体精製したところ97kDaフラグメントが得られた。これは既にvWFのGPIb結合ドメインとして知られたペプチド領域Val^<449>ーLys^<728>のホモダイマーであることがわかった。ウェスタンブロット法でNMCー4は非還元のもの同様還元で得られる52/48kDaのものも認識したが、還元後カルボキシメチル化したものは認識しなかった。現在同じペプチド領域を認識する他のモノクロナール抗体とのエピトープの相異について検討中である。
3) アスパラギン結合糖鎖:昨年に引続きサブユニット当り12ケのAsnに結合している糖鎖の構造を決定しているが、高マンノース型糖鎖、複合型糖鎖、混成型糖鎖などの存在がわかった他、さらに少くとも7種類の糖鎖構造が存在することが明らかとなり、現在これらのものの解析を続行中である。
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