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1989 年度 研究成果報告書概要

フォンビルブラント因子の構造解析を中心とした血小板凝集に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 62440087
研究種目

一般研究(A)

配分区分補助金
研究分野 物質生物化学
研究機関藤田保健衛生大学

研究代表者

千谷 晃一  藤田学園保健衛生大学, 医学部, 教授 (60179942)

研究分担者 藤村 吉博  奈良県立医科大学, 輸血部, 助教授 (80118033)
松井 太衛  藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助手 (90183946)
小山 文隆  藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助手 (40194641)
関口 清俊  藤田学園保健衛生大学, 医学部, 講師 (50187845)
水落 次男  藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助教授 (90133149)
研究期間 (年度) 1987 – 1989
キーワードフォンビルブラント因子 / 血小板凝集 / 血小板膜GPlb / 血小板膜GPIIb / IIIa / ボトロセチン / リストセチン / 単クロ-ン抗体 / アスパラギン結合糖鎖
研究概要

1)精製ボトロセチンの性質と構造:昨年に引続き、in vitroでフォンビルブラント因子(vWF)による血小板凝集を惹起するボトロセチンの蛇毒(Bothrops jararaca)よりの精製法を確立し(IgGの粗毒より約5ー10mg)、それがvWFの存在下血小板膜GPIIb/IIIaを欠くGlanzmann血小板無力症患者の血小板は凝集するが、GPIbを欠くBernardーSoulier症候群のそれは凝集しない、vWFやGPIbに対する種々の単クロ-ン抗体を用いた抑制実験の結果からボトロセチンとリストセチンの反応機序に相違のあることなど種々興味深い結果を得た(論文投稿中)。さらにボトロセチンに多数含まれるシステイン残基はすべてジスルフィド結合を形成していることを明らかにした上で、現在その一次構造を決定中である。
2)vWFの機能ドメインの発現に既に合成ペプチドを用いた実験から、vWFの血小板膜GPIIb/IIIaとの接着活性中心であると推定されているArgーGlyーAspーSerを中心とした14残基からなるアミノ酸配列をコ-ドする合成DNAを細胞接着活性のないIgG結合タンパク質プロテインAの発現ベクタ-(pRIT2T)に挿入し、大腸菌で発現させたところ、有意の細胞接着活性を示す人工タンパク質が得られた(論文準備中)。現在その他の機能ドメインの発現も試みている。
3)vWFのアスパラギン結合糖鎖:昨年に引続きvWFの糖鎖構造の決定を進めているが、その過程で約10%のアスパラギン結合糖鎖の非還元末端のガラクト-スのαーフコ-スの結合していることが明かとなった。さらにvWFがH型糖鎖に特異的なレクチンと反応し、それがフコ-スにより阻害されるので、その一部にH型糖鎖構造Fucα1ー2 Gal βー1ー4GlcNAcーが存在することはほぼ確実である。既にvWFに血液型糖鎖の存在することが示唆されていたが、その実体が明らかになったのは初めてである(論文準備中)。

  • 研究成果

    (28件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (28件)

  • [文献書誌] T.Maeda,R.Oyama,K.Ichihara-Tanaka,F.Kimizuka,I.Kato,K,Titani,& K.Sekiguchi: "A Novel Cell Adhesive Protein Engineered by Insertion of the Arg-Gly-Asp-Ser Tetrapeptide" J.Biol.Chem.264. 15165-15168 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] M.Katayama,F.Hino,Y.Odate,S.Goto,F.Kimizuka,I.Kato,K.Titani,& K.Sekiguchi: "Isolation and Characterization of Two Monoclonal Antibodies That Recongnize Remote Epitopes on the Cell-Binding Domain of Human Fibronectin" Exp.Cell.Res.185. 229-236 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] K.Ichihara-Tanaka,K.Titani,& K.Sekiguchi: "Recombinant Carboxyl-terminal Fibrin-binding Domain of Human Fibronectin Expressed in Mouse L Cells" J.Biol.Chem.265. 401-407 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] K.Nishino,Y.Fujimura,K.Niinomi,Y.Takahashi,A.Yoshioka,H.Fukui,Y.Usami,K.Titani,Z.N.Ruggeri,& T.S.Zimmerman: "Enhanced Botrocetin-induced Type IIB von Willebrand Factor Binding to Platelet Glycoprotein Ib Intiates Hyperagglutination of Normal Platelets" Am.J.Haemat.(in press). (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Y.Fujimura,Y.Usami,K.Titani,K.Niinomi,K.Nishio,T.Takase,A.Yoshioka,& H.Fukui: "Studies on Anti-von Willebrand Factor(vWF)Monoclonal Antibody(MoAb)NMC-4 which Inhibits both the Ristocetin-and Botrocetin-induced vWF Bindings to Platelet Glycoprotein(GP)Ib" Blood(in press). (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Y.Fujimura,K.Titani,Y.Usami,R.Oyama,T.Matsui,H.Fukui,& Z.M.Ruggeri: "Chemical Characterization of Highly Purified Botrocetin:Platelet Coaggulutinin from the Snake Venom of Bothrops jararaca" Biochemistry(in press). (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Fujimura, Y., Titani, K., Holland, L.Z., Roberts, J.R., Kostel, P., Ruggeri, Z.M., & Zimmerman, T.S.: "A Heparin-binding Domain of Human von Willebrand Factor. Characterization and Localization to a Tryptic Gragment Extending from Amino Acid Residue Val-449 to Lys-728." J. Biol. Chem.262. 1734-1739 (1987)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Berkowitz, S.D., Dent, J., Roberts, J., Fujimura, Y., Plow, E.F. Titani, K., Ruggeri, Z.M., & Zimmerman, T.S.: "Epitope Mapping of the von Willebrand Factor Subunit Distinguishes Fragments in Normal and Type IIA von Willebrand Disease from Those Generated by Plasmin." J. Clin. Invest. 79 524-531 (1987).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Sadler, J.E., Shelton-Inloes, B.B., Sorace, J.M., & Titani, K.: "Cloning of cDNA and Genomic DNA for Human von Willebrand Factor" Cold Spring Harbor Sym. on Quantitative Biology 51, 515-523 (1987).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Foster, P.A., Flucher, C.A., Marti, T., Titani, K., & Zimmerman, T.S.: "A Major Factor VIII Binding Domain Resides within the Amino-terminal 272 Amino Acid Residues of von Willebrand Factor." J. Biol. Chem. 262 8443-8446 (1987).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Titani, K., Takio, K., Handa, M., & Ruggeri, Z.M.: "Amino Acid Sequence of the von Willebrand Factor-binding Domain of Platelet Membrane Glycoprotein Ib" Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 5610-5614 (1987).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Titani, K.: "Human von Willebrand Factor and the Problems in Sequence Analysis of a 280 K Dalton Protein." Methods in Protein Sequence Analysis (Walsh, K.A. ed) 171-187 (1987).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Marti, T., Rosselet, S.J., Titani, K., & Walsh, K.A.: "Identification of Disulfide-bridged Substructures within HUman von Willebrand Facrot." Biochemistry 26 8099-8109 (1987).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Titani, K., Marti, T., Takio, K., & Walsh, K.A.: "Primary Structure of Human von Willebrand Factor." Coagulation and Bleeding Disorders, the Role of Factor VIII and von Willebrand Factor (Zimmerman, T.S.ed) 99-116 (1988).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Titani, K., & Walsh, K.A.: "Human von Willebrand Factor, the Molecular Glue of Platelet Plugs." TIBS 13 94-97 (1988).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Matsuura, H., Takio, K., Titani, K., Greene, T., Levery, S.B. Salyan, M.E.K., & Hakomori, S.: "The Oncofetal Structure of Human Fibronectin Defined by Monoclonal Antibody FDC-6." J. Biol. Chem. 263 3314-3322 (1988).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Berkowitz, S.D., Nozaki, H., Titani, K., Murachi, T., Plow, E.F. & Zimmerman, T.S.: "Calpains and Elastase Do Not Produce the von Willebrand Factor Fragments Present in Normal Plasma and IIA von Willebrand Disease." Blood 72 721-727 (1988).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Oyama, F., Murata, Y., Suganuma, N., Kimura, T., Titani, K., & Sekiguchi, K.: "Patterns of Alternative Splicing of Fibronectin Pre-mRNA in Human Adult and Fetal Tissues." Biochemistr 28 1428-1434 (1989).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Sekiguchi, K., & Titani, K.: "Probing Molecular Polymorphism of Fibronectins with Antibodies Directed to the Alternatively Spliced Peptide Segments." Biochemistry 28.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Oyama, F., Hirohashi, S., Shimosato, Y., Titani, K. & Sekiguchi K.: "Deregulation of Alternative Splicing of Fibronectin Pre-mRNA in Molignant Human Liver Tumors." J. Biol. Chem. 264 10331-10334 (1989).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Maeda, T., Oyoama, R., Ichihara-Tanaka, K., Kimizuka, F., Kato, I., Titani, K., & Sekiguchi, K.: "A Novel Cell Adhesive Protein Engineered by Insertion of the Arg-Gly-Asp-Ser Tetrapeptide." J. Biol. Chem. 264.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Katayama, M., Hino, F., Odate, Y., Goto, S., Kimizuka, F., Kato, I., Titani, K., & Sekiguchi, K.: "Isolation and Characterization of Two Monoclonal Antibodies That Recognize Remote Epitopes on the Cell-Binding Domain of Human Fibronectin." Exp. Cell Res. 185 229-236 (1989).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Ichihara-Tanaka, K., Titani, K., & Sekiguchi, K.: "Recombinant Carboxyl-Terminal Fibrin-Binding Domain of Human Fibronectin Expressed in Mouse L Cells." J. Biol. Chem. 265 401-407 (1990).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Oyama, F., Hirohashi, S., Shimosato, Y., Titani, K., & Sekiguchi, K.: "Oncodevelopmental Regulation of the Alternative Splicing of Fibronectin Premessenger RNA in Human Lung Tissues." Can. Res. 50 1075-1078 (1990).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Nishio, K., Fujimura, Y., Niinomi, K., Takahashi, Y., Yoshioka, A., Fukui, H., Usami, Y., Titani, K., Ruggeri, Z.M. & Zimmerman, T.S.: "Enhanced Botrocetin Induced Type IIB Von Willebrand Factor Binding to Platelet Glycoprotein Ib Initiates Hyperagglutination of Normal Platelets." Am. J. Hemat.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Shimomura, T., Fujimura, K., Maehama, S., Takemoto, M., Oda, K., Fujimoto, T., Oyama, R., Suzuki, M., Ichihara-Tanaka, K. & Kuramoto, A.: "Rapid Purification and Characterization of Human Platelet Glycoprotein V: the Amino Acid Sequence Contains Leucine-rich Repetitive Modules as ain Glycoprotein Ib." Blood.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Fujimura, Y., Usami, Y., Titani, K., Niinomi, K., Nishio, K., Takase, T., Yoshioka, A., & Fukui, H.: "Studies on Anti-von Willbrand Factor (vWF), Monoclonal Antibody (MoAb) NMC-4 which Inhibits Both the Ristocetin- and Botrocetin-Induced vWF Bindings to Platelet Glycoprotein (GP)Ib." Blood.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Tsuji, T., Yamamoto, F., Miura, Y., Takio, K., Titani, K., Pawar, S., Osawa, T., & Hakomori, S.: "Characterization through cDNA Cloning of Galactoprotein b3 (Gap b3), a Cell Surface Membrane Glycoprotein Showing Enhanced Expression on Oncogenic Transformation: Identification of Gap b3 as a Member of the Infegrin Superfamily." J.Biol.Chem.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 1993-03-26  

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