| 研究課題/領域番号 |
62470148
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
物質生物化学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
松原 央 大阪大学, 理学部, 教授 (00028242)
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| 研究分担者 |
吉川 信也 姫路工業大学, 工学基礎研究所, 教授 (40068119)
高橋 康弘 大阪大学, 理学部, 助手 (10154874)
若林 貞夫 大阪大学, 理学部, 助手 (80148436)
福山 恵一 大阪大学, 理学部, 講師 (80032283)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| キーワード | チトクロムbc_1 / ユーグレナ・チトクロムc__-_1 / 酵母チトクロムc__-_1 / らん藻チトクロムb_6f複合体 / 末端酸化酵素 / ヘム結合様式 |
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| 研究概要 |
1.ウシ心筋ミトコンドリアからチトクロムbc_1複合体を単離する方法を改良し、実働日数の短縮と収率の筒上に成功した。この標品を用いて各種の結晶化を試みたが、X線回析像をうるに十分な結晶はえられなかった。
2.ユーグレナ・チトクロムb__-c__-_1複合体をサブミトコンドリア粒子より精製した。そのサブユニット構成はチトクロムb__-、c__-_1、鉄・硫黄蛋白質を含む10ケから成り、他の生物のものととくに大きい差はなかった。しかしそのチトクロムc__-_1のα吸収帯は561nmにあり、またそのビリジンヘモクロムも553nmで、一般のC型チトクロムに比べ、いずれも長汲長側にシフトしていた。これはこの生物のチトクロムC_<553>の性質と類似しており、そのヘム近辺のアミノ酸配列から、ヘムを結合する2つのシステインの中1つがPheに置換しているためであることが判明した。
3.これを確認するためユーグレナのc__-_1に対応するcDNAを取り出し、その全塩基配列を決定した。このものは243アミノ酸から成るc__-_1のポリペプチドをコードする領域を含んでいた。ヘム近辺の構造から前項の事実を確認した。さらにこのc__-_1は鉄の配位子、c__-との反応部位、膜結合領域のいずれも他のc__-_1に比べて保存するものであった。
4.酵母チトクロムc__-_1のC末端部を遺伝子操作によって変異させ、これが電子伝達能や複合体IIIへの組み込みにどう影響するか検討した。疎水性部位がこれらに重要な役割を果すことを示した。
5.らん藻よりチトクロムb__-_6f複合体を精製し、そのサブユニット構成、活性などを検討した。また、らん藻のチラコイド膜から調製した酸化酵素はb_6fからC_<553>を経て電子を受けとり水にすることが判明し、らん藻におけるb_1f複合体が光合成のみならず、呼吸においても共通の電子伝達中間体であることが示された。
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