1989 年度実績報告書

単細胞増殖系における一年生少染色体植物の遺伝子型および染色体型の伝達性の研究

研究課題

研究課題/領域番号	62480002
研究機関	広島大学
研究代表者	田中隆莊広島大学, 学長 (00033796)
研究分担者	谷口研至広島大学, 理学部, 講師 (10163627) 近藤勝彦広島大学, 理学部, 教授 (00110817)
キーワード	凍結保存 / 苗条原基 / 懸濁細胞 / 酵素抗体法 / 液体窒素 / 遺伝子銀行
研究概要	親植物と同じ遺伝子型を保持したままで植物を長期間保存するために液体窒素を用いる方法が有効であるが、種子の保存を除いて一般的に利用されるには至っていない。そこで、Tanaka & Ikeda(1983)によって開発されたクロ-ン増殖体である苗条原基を利用することによって、凍結保存をより簡単にすることが可能となった(Taniguchi et al.1988)。本研究においては、苗条原基を単細胞レベルまで落としていくことによって本当の意味でのクロ-ン、すなわち、単細胞由来の遺伝子型として保存し、その伝達過程の人為的制御法を見いだすことを目的とした。単細胞の凍結保存に関しては、クレピスの懸濁細胞を誘導し、これより苗条原基を経て植物体に再生するクロ-ン増殖系の作出に成功した。この懸濁細胞を凍結保存に利用した。ここで凍結保存の大きな問題点として、生存判定を如何に早くするかが、凍結保存のシステム化にとって重要であり、従来より利用されている蛍光ダイアセテ-ト(生判定)とサフラニン(死判定)の二重染色法により細胞の生存を確認するとともに、新たに、酵素抗体法を用いて細胞分裂活性を測定する方法を開発した。酵素抗体法はチミジンのアナログであるBrdUを標識として取り込ませて、これを抗BrdU抗体を用いて検出する方法であり、植物細胞ではじめて適用されたものである。これらの方法を利用して、凍結保存及び融解・再培養での細胞の生存を調べることによって、凍結保存条件、すなわち凍害防御剤の種類(DMSO、ソルビト-ル)と濃度(0〜20%)、前培養液(ソルビト-ル)の濃度(0〜1.0M)の検討を行い、懸濁細胞における凍結保存法の確立を行った。また遺伝子型及び染色体型の伝達に関しては、単細胞レベルでは確認するまでには行かなかったが、組織レベルでは、7種類について安定に伝達されていることが確かめられた。今後、更に単細胞増殖系について凍結保存条件の向上のために改良を加えていきたい。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Tanake,R.: "Artificial induction of clonal tetraploid in an annual plant,Haplopappus gracilis(2n=4),by using tissue cultured shoot primordia." Jpn.J.Genet.63. 113-125 (1988)
[文献書誌] Taniguchi,K.: "Freeze preservation of tissue cultured shoot primordium in annual Haplopappus gracilis(2n=4)." Jpn.J.Genet.63. 267-272 (1988)
[文献書誌] 田中隆荘: "組織培養苗条原基と染色体の保存." 薬学雑誌. 108. 1023-1039 (1988)
[文献書誌] Taniguchi,K.: "Induction of shoot primordia from calli of Crepis capillaris(2n=6)and regeneration of plantlets." Jpn.J.Genet.64. 199-208 (1989)
[文献書誌] Taniguchi,K.: "Preservation of ohromosome-types and genotypes in annual plants by tissue-cultured shoot primordium." Plant Chromosome Research 1987.(Ed.D.Hong.). 243-250 (1989)
[文献書誌] Taniguchi,K.: "Preservation of chromosome-types and genotypes in suspended cells of Crepis capillaris by LN_2 storage." Jpn.J.Genet.(1990)
[文献書誌] 谷口研至: "凍結保存ー動物・植物・微生物ー" 酒井昭編, 300 (1987)
[文献書誌] 谷口研至: "育種学最近の進歩第29集" 日本育種学会編, 131 (1988)

1989 年度 実績報告書

単細胞増殖系における一年生少染色体植物の遺伝子型および染色体型の伝達性の研究

研究代表者

田中 隆莊 広島大学, 学長 (00033796)

研究成果

[文献書誌] Tanake,R.: "Artificial induction of clonal tetraploid in an annual plant,Haplopappus gracilis(2n=4),by using tissue cultured shoot primordia." Jpn.J.Genet.63. 113-125 (1988)

[文献書誌] Taniguchi,K.: "Freeze preservation of tissue cultured shoot primordium in annual Haplopappus gracilis(2n=4)." Jpn.J.Genet.63. 267-272 (1988)

[文献書誌] 田中隆荘: "組織培養苗条原基と染色体の保存." 薬学雑誌. 108. 1023-1039 (1988)

[文献書誌] Taniguchi,K.: "Induction of shoot primordia from calli of Crepis capillaris(2n=6)and regeneration of plantlets." Jpn.J.Genet.64. 199-208 (1989)

[文献書誌] Taniguchi,K.: "Preservation of ohromosome-types and genotypes in annual plants by tissue-cultured shoot primordium." Plant Chromosome Research 1987.(Ed.D.Hong.). 243-250 (1989)

[文献書誌] Taniguchi,K.: "Preservation of chromosome-types and genotypes in suspended cells of Crepis capillaris by LN_2 storage." Jpn.J.Genet.(1990)

[文献書誌] 谷口研至: "凍結保存ー動物・植物・微生物ー" 酒井昭編, 300 (1987)

[文献書誌] 谷口研至: "育種学最近の進歩第29集" 日本育種学会編, 131 (1988)

1989 年度実績報告書

田中隆莊広島大学, 学長 (00033796)