| 研究課題/領域番号 |
62480235
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
大城戸 宗男 東海大学, 医学部, 教授 (90055856)
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| 研究分担者 |
小澤 明 東海大学, 医学部, 講師 (20096209)
猪子 英俊 東海大学, 医学部, 助教授 (10101932)
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| キーワード | 尋常性乾癬 / HLA抗原 / 疾患感受性遺伝子 / 制限酵素断片長多型性 / RFLP / 遺伝子DNA解析 / サザンハイブリダイゼーション / HLAクラスI抗原遺伝子領域 |
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| 研究概要 |
昭和62年度の研究により得られた知見(尋常性乾癬において、そのHLA-C抗原遺伝子領域に、RFLPが存在し、同領域の解析により、BamHI 4.5kb,PstI3.1kbの2つのDNAバンドが、本症では認められた)より、昭和63年度研究計画として、本症のHLA-C抗原遺伝子領域にみられたrestriction fragment length polymorphisms(RFLP)を示したDNAバンドのクローニングを目的として研究を進めた。
1.方法
(1)DNA抽出:患者および健康人の末梢血リンパ球を採集。Proteinase KSDS phenol法によりDNAを抽出、精製する。
(2)サザンハイブリダイゼーション:BamHIおよびPstI処理後、HLA-C抗原CDNAプローブを用い、ハイブリダイズにより、RFLPを示すDNAバンドを得る。
(3)DNAバンドのクローニング:得られたDNAバンドをアガロースゲルより溶出させ、プラスミッドベクターPAT153に挿入する。大腸菌X1776に形質転換し、コロニーハイブリダイゼーション法により、乾癬患者に認められた特異的な遺伝子のクローニングを行う。
2.研究成果
(1)患者および健康人の末梢リンパ球を採集、凍結保存した。
(2)サザンハイブリダイゼーションに必要なHLA-C抗原CDNAプローブの用意を完了した。
(3)遺伝子クローンを保有するプラスミッドの増殖を完了した。
(4)(1)〜(3)の本年研究計画に沿った準備を完了し、目的とするDNAバンドのクローニングを現在試みている。
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