| 研究概要 |
遺伝子工学的手技を用いてアポ蛋白E異常遺伝子保有者の変異部位を明らかにした. またアポ蛋白Eの変異部位と高脂血症の関係を検討し,アポ蛋白Eの生理活性部位を明確にした. 以上の方法によりIII型高脂血症の発症機構について検討した.
1.アポ蛋白EmRNAに対する相補性DNA(cDNA)をSP64プラスミッドに組み込ませ, SP6RNAポリメラーゼを使用して^<32>Pラベルしたアポ蛋白Eライボプローブを作製した.
2.健常人および高脂血症患者から採血し, 白血球細胞中からDNAを抽出した. このDNAを制限酵素EcoRIで切断し, アガローズ電気泳動で分離した.
3.^<32>PラベルしたRNAプローブを用いて, アポ蛋白EDNAの変異部位を明らかにした. 現在のところ, アポEイソフォームのE.ナ_<2.ニ>型では, 526番目の塩基シトシン(C)がチミジン(T)に点突然変異していることが明らかとなった. そのため158番面のアミノ酸アルギニンがシステインに変化しているものと推定された. このためE.ナ_<2.ニ>型では, アポE受容体との結分が低下し, IDLの分解が進行せず, βーVLDLを生じやすくなるものと思われる.
現在の方法は, 被験者白血球からDNAを抽出し, これを材料としている. 従って試料の量が限定されるため, 手技が容易でない. そのため, 現在, DNAを増幅するシステムを開発している. これが完成すると, ごく少量の血液からDNA変異部位を明らかにすることが可能となり, マススクリーニングも可能となる.
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