| 研究課題/領域番号 |
62480261
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
大野 竜三 名古屋大学, 医学部, 講師 (70093002)
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| 研究分担者 |
谷本 光音 名古屋大学, 医学部, 医員
小椋 美知則 名古屋大学, 医学部, 医員 (40231229)
森島 泰雄 名古屋大学, 医学部, 助手 (20220056)
斎藤 英彦 名古屋大学, 医学部, 教授 (20153819)
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| キーワード | 骨髄巨核芽球細胞株 / 骨髄巨核球 / MEG-01 / 細胞培養株 / がん遺伝子 / 分化 / phorbol esters;TPA,分化誘導 / c-myc / c-fos / c-sis |
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| 研究概要 |
昭和62年度にひきつづき、巨核芽球系細胞の分化機構を蛋白・遺伝子レベルで解析することを目的とし、分化能を有する培養細胞株MEG-01細胞を用いて、計画調書の実験予定に沿って実験を行い、以下の如き研究成果を得た。(1)種々の分化誘導物質によりMEG-10細胞をin vitroで処理後、継時的に回収した細胞よりpoly A^+RNAを調整し、各種オンコジーンプローブで調べた結果、TPA(フォルボールエステル)10^<-8>M処理後30分から4時間でc-mycの発現の消退を、処理後24〜48時間以降にc-sisの出現を、また処理後1時間にてc-fosの一過性の出現を認めた。この内、c-myc,c-fosの発現変化は、更にslot blotを用いた定量化実験に於いても確認された。c-sisの発現は認められたものの極めて微量であり、有意な血小板由来分化因子(PDGF)の上昇には至っていないことが、bioassayにて証明された。(2)c-myc遺伝子のTPAによる発現抑制の機構を更に詳しく解析するため、先づ、既知のc-myc遺伝子5'側の3箇所のDNaseI感受性部位につきTPA処理群と無処理群でそれぞれnucleic DNAを調整しDNaseI10分間処理して検討した所、処理群に於いてEcoRI切断により得られる高感受性部位が特異的に消失していた。(3)MEG-01細胞のc-myc遺伝子には、他の系列細胞とは異なる遺伝子部位に抑制性蛋白がTPA処理により結合し、転写レベルでの増幅制御を行っていることが明らかとなった。また、他の細胞系列(HL-60、U-937)で認められるc-mycの発現の分化に伴う低下はTPA処理後24時間には、c-mycレベルは回復していた。このことは、Bリンパ球で見られるのと同様に、巨核芽球系細胞に於いては、細胞分化にもc-mycが関与していることを示唆している。
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