| 研究概要 |
1.ラット脳膜画分からBrijで可溶化し,5段階のクロマトグラフィーでP物質分解酵素を精製した. 精製酵素の分子量は55K,P物質のPro4ーGln5,Gln5ーGln6,Gln6ーPhe7の3つの結合を2:2:3の比率で切断した. それらの切断は,EDTA,OーフェナントロリンおよびSH阻害剤で阻害された. 以上の結果から,本酵素は新しいタイプのメタルプロテアーゼであり,活性発現にSH基を必要とすることが示された. 2.ニューロブラストーマ細胞膜およびラット脳シナプス膜から,LHRHの分解に関与するフラグメント(1ー5)生成酵素とアンジオランシン変換酵素を単離した. 両膜画分から得られるBrig可溶化画分の水銀セファロースクチマトグラフィーで両者を分離し,別々に3段階のクロマトグラフィーでさらに精製した. 前者の分子量は110K,EDTA,OーフェナントロリンおよびSH阻害剤で阻害されることから,活性発現にSH基を必要とするメタルプロテアーゼであることが示された. 後者の分子量は22OKである. 3.ニューロブラストーマ細胞膜から,ダイノルフィルの分解に関与するトリプシン様酵素と2種のチオールプロテアーゼを単離した. トリトン可溶化画分の大豆トリプシンインヒビター(STI)セファロースを用いたクロマトグラフィーで前者を単離した. 前者の分子量は33K,Arg6ーArg7とLys11ーLeu12の2つの結合を3:2の比率で切断した. STIセファロースクロマトグラフィーの素通り画分から水銀セファロースカラムを用いて後者を捕捉した. 後者はイオン交換クロマトグラフィーでさらに2つの活性画分に分離されたので,別々に精製した. 一方は分子量110K,Arg6ーArg7結合のみを切断するという高い基質特異性を有し,他方は分子量70K,Lys11ーLeu12とLeu12ーLys13の2つの結合を切断した.
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