| 研究課題/領域番号 |
62570125
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
病態医化学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
渡辺 毅 東京大学, 医学部(病), 助手 (80158641)
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| 研究分担者 |
堀江 行雄 東京大学, 医学部(病), 助手 (40211552)
木下 誠 東京大学, 医学部(病), 助手 (70186295)
寺本 民生 東京大学, 医学部(病), 助手 (20133077)
清水 孝雄 東京大学, 医学部・栄養学, 助教授 (80127092)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| キーワード | プロスタグランジン / 腎 / 受容体 |
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| 研究概要 |
腎におけるプロスタグランジン(PG)の作用機構の分子レベルでの理解とその生理的病態的意義を知る目的の第一歩として、腎髄質のPGE受容体の精製を試みた。その結果、イヌ腎髄質膜分画より、ジギトニンにより、PGE受容体は効率よく活性を保ったまま可溶化された。さらにこの可溶化蛋白をゲル3過、レクチン・アフィニティー、イオン交換カラム、等電点電気泳動などの組み合わせにより有意に精製された。又、この部分精製標品は、この受容体が初め持っていたGTPに対する感受性を失ない、GTP結合蛋白のはづれたものと考えられ、GTP結合蛋白との再構成実験が可能であった。この部分精製蛋白を免疫原として、常法に従って、免疫マウス脾細胞とミエローマ細胞のハイブリドーマを作製、培養上清の抗体活性のブドウ球菌菌体による免疫沈澱法でスクリーニングして、抗受容体モノクローナル抗体を得ようと試みたが、数千ウェルのスクリーニングにも拘らず現時点では得られていない。また、受容体蛋白の精製の向上のため、リガンドアウィニティークロマトの検討を行なったが、PGE_2のゲルへの固定化のための化学修飾により、その受容体蛋白への結合能を失うためこの方法は不可能と判断した。一方、近年確立されてきた、アフリカツメガエル卵母細胞での発現系を利用した受容体蛋白をコードしたcDNAのクローニングをこの受容体蛋白に応用できないかと考え、現在イヌ腎髄質より抽出したmRNAを卵母細胞に注入し、受容体蛋白の発現の有無を検討しているが、ある程度陽性の結果を得ており、今後は、精製のスケールの増加によるさらなる改良、モノクローナル抗体作製を目指しつつ、この方向に重点を移して行くつもりである。
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