| 研究概要 |
本研究初年度において、NONマウス肝より分離した高分子DNAよりλファージを用い1.1×10^6Dfuの遺伝子ライブラリーを完成した。ラットプレプロインスリンIcDNAをプローブとしてプラークハイブリダイゼーション法によりスクリーニングし、3次まで行った結果この遺伝子ライブラリーより5個の陽性プラークを得た。これらはEcoRI消化後プローブとハイブリダイズする約1.4kbp、BamHI消化後約2.4kbpの断片を有するそれぞれλNins-I、λNins-IIの2つの独立したクローンからなることを確認した。
研究2年目では、まずこのクローンをBluescriptにサブクローニングし、pNins-I、IIを作成した。このプラスミドDNAを抽出し、マウスで唯一報告されているBALB/cマウスインスリン遺伝子の制限地図を比較すると、調べた制限酵素の範囲内ではpNins-I、pNins-IIはそれぞれインスリンIおよびIIと一致した。次にBluescriptに組み込んだpNins-IとIIについて約200塩基ずつ短いdeletion mutantを作成した。これらについて^<35>S-ATPを用いdideoxy法(Sanger法)によりpNins-I、pNins-IIの塩基配列を決定した。(1)pNins-I、pNins-IIはそれぞれマウスインスリンI、IIを含み、1384塩基、2512塩基よりなっていた。
(2)pNins-IはBALB/cの配列と完全に一致した。
(3)NONマウスインスリンI、IIとも5'側にTATAbox、Insu lin enhancer box,Enhancer care sequenc eを全て有し構造異常も認めなかった。
(4)NONマウスIIはBALB/cが有しない100塩基余りの挿入をイン スリン転写開始部位より994塩基上流に有し、また3'側に3個の点変異を有して いた。このNONマウスインスリンII5'側上流の挿入部がNONマウスに認めら れるインスリンmRNA減少に対してどのような効果を発揮するかは本研究では不明 であるが、非常に興味ある知見が得られた。
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